脊髓水平MiRNA-219通過CaMKⅡγ信號通道調(diào)整慢性炎性疼痛.pdf

1、目的：慢性疼痛仍缺乏有效治療手段，理想治療方法和藥物的開發(fā)依賴于對慢性疼痛發(fā)生機制的認識。脊髓神經(jīng)元可塑性改變被認為是慢性疼痛發(fā)生和維持的關鍵環(huán)節(jié)，神經(jīng)元可塑性改變很大程度上依賴于神經(jīng)元膜上受體、離子通道和胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路的表達改變，而這些改變又依賴于各自基因的表達調(diào)控，但慢性疼痛的基因調(diào)控機制仍不清楚。MiRNA是近年發(fā)現(xiàn)基因表達調(diào)控的一種方式，它參與調(diào)節(jié)多種生理和病理過程。本項目擬以慢性炎性痛為模型，從整體、細胞和分子水平闡明脊髓m

2、iRNA-219參與痛行為調(diào)節(jié)機制，為研發(fā)理想鎮(zhèn)痛藥提供新靶標。
　　方法：應用RT-PCR技術(shù)分析脊髓miRNA-219表達;應用熱輻射法和Von-Frey實驗分別檢測熱痛覺過敏和機械痛異常;應用免疫組織化學方法檢測脊髓背角c-Fos蛋白表達;應用信息學預測法結(jié)合體內(nèi)干擾實驗確定miRNA-219作用靶標蛋白;應用慢病毒介導基因表達方法上調(diào)或下調(diào)體內(nèi)miRNA過表達;應用Westernblot方法檢測脊髓CaMKⅡγ表達水平。<

3、br>　　結(jié)果： miRNA-219在慢性炎性痛模型(CFA)中表達顯著下降，且呈現(xiàn)明顯的時間相關性。鞘內(nèi)注射miRNA-219類似物(mimics)或過表達miRNA-219的慢病毒上調(diào)miRNA-219表達可顯著減輕熱痛覺過敏和機械痛覺異常，并減少脊髓背角神經(jīng)元敏化標志蛋白c-Fos表達;在正常大鼠鞘內(nèi)注射慢病毒下調(diào)miRNA-219表達則顯著誘發(fā)熱痛覺過敏和機械痛覺異常，并增加脊髓背角c-Fos表達;細胞及在體實驗均證明CaMKⅡ