電針對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓BDNF-TrkB-KCC2信號通道的影響.pdf

1、目的：
　　觀察電針對坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷（CCl）模型大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響；同時觀察電針對BDNF-TrkB-KCC2信號傳導(dǎo)通路上各受體的基因及蛋白表達(dá)的影響。闡述由小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的BDNF-TrkB-KCC2信號傳導(dǎo)通道在電針治療神經(jīng)病理性疼痛中的鎮(zhèn)痛作用及可能機制。
　　方法：
　　選用96只清潔級雄性SD大鼠，隨機分為正常組、假模組、模型組和電針組。建立CCI大鼠模型，于術(shù)前及術(shù)后3、5、7、1

2、0、12、14天分別測量大鼠術(shù)側(cè)足機械縮足反射閾值（MWT）和熱縮足反射潛伏期（TWL）。大鼠術(shù)后恢復(fù)7天后取術(shù)側(cè)“足三里”（ST-36）與“陽陵泉”（GB-34）穴進(jìn)行電針治療，采用2/100Hz，1.5mA電流刺激，每天1次，每次30min，連續(xù)7天，觀察大鼠造模前后及電針治療前后痛閾的改變。電針后處死大鼠，取脊髓L4-6行HE染色觀察組織病理學(xué)改變，應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)法標(biāo)記脊髓背角Iba1（小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物）和BDNF；運用免疫組化

3、法檢測TrkB、KCC2蛋白表達(dá)情況；應(yīng)用western-blot方法檢測脊髓BDNF、p-TrkB、TrkB、KCC2和GABAA-γ2蛋白表達(dá)情況；并運用實時熒光定量PCR方法檢測Iba1、BDNF、TrkB、KCC2和GABAA-γ2的mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　?、臗CI造模后第3天大鼠機械痛閾及熱痛閾較造模前及假模組均降低，出現(xiàn)痛覺過敏現(xiàn)象，模型組術(shù)后第14天與假模組相比差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001

4、），經(jīng)過7天的電針治療，術(shù)后第14天電針組大鼠痛閾明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。⑵正常組和假模組神經(jīng)元形態(tài)完整、規(guī)則，胞體內(nèi)核仁清晰，并可見分布均勻的尼氏體。模型組可見神經(jīng)元變性或壞死，細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、碎裂和溶解，并可見周圍組織疏松。電針組可見神經(jīng)元排列存在輕度不規(guī)則，部分神經(jīng)元出現(xiàn)核固縮，周圍組織相對模型組致密，總體情況優(yōu)于模型組。⑶免疫熒光染色法測定各組大鼠脊髓背角Iba1及BDNF表達(dá)：與假模組相比較，模型組

5、坐骨神經(jīng)損傷后活化的小膠質(zhì)細(xì)胞及BDNF表達(dá)明顯增加。小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)由分枝狀轉(zhuǎn)變?yōu)橥黄鸹乜s，胞體相對增大，數(shù)量增多。并且，BDNF與小膠質(zhì)細(xì)胞存在共表達(dá)。經(jīng)過7天的電針治療后，與模型組相比電針組活化的小膠質(zhì)細(xì)胞及BDNF表達(dá)明顯減少。⑷免疫組化結(jié)果顯示，CCI術(shù)后第14天，各組大鼠脊髓背角造模側(cè)KCC2蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.01）。經(jīng)電針干預(yù)7天后，電針組脊髓背角造模側(cè)KCC2蛋白表達(dá)增多，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）