米諾環(huán)素對慢性神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞激活的影響.pdf

1、目的：采用大鼠慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷(chronic constriction injuryCCI)建立慢性神經(jīng)病理性疼痛模型。 1．觀察CCI大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞標志物膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表達，研究脊髓星形膠質(zhì)細胞是否參與脊髓水平神經(jīng)病理性疼痛傷害性信息的整合及其時程變化特征。 2．觀察米諾環(huán)素對CCI大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞標志物膠質(zhì)原纖維酸性蛋白

2、(glial fibrillary acidic protein，GFAP)表達的影響，探討米諾環(huán)素對慢性神經(jīng)病理性疼痛的作用效應及可能的機制。 方法：根據(jù)Bennett-Xie(1988)所述建立CCI模型。健康SD雄性大鼠75只隨機分為5組：空白對照組(A組，n=10)；假手術組(B組，n=15)，B組大鼠僅分離暴露坐骨神經(jīng)，不行坐骨神經(jīng)結(jié)扎，余操作同C組；CCI對照組(C組，n=15)，C組大鼠在坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷手術前1個

3、小時，腹腔沒有注射米諾環(huán)素，而給予與D組注射米諾環(huán)素(40mg/kg)相同體積的生理鹽水，每24h注射一次，連續(xù)注射14天；CCI預給藥組(D組，n=15)D組大鼠在坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷手術前1個小時，腹腔注射米諾環(huán)素40mg/kg，每24h注射一次，連續(xù)注射到CCI術后14天；CCI治療組(E組，n=20)，E組大鼠行坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷手術，在確定慢性神經(jīng)病理性疼痛模型建立成功之前僅注射與D組注射米諾環(huán)素(40mg/kg)相同體積的生理鹽水

4、，每24h注射一次，而在確定大鼠慢性神經(jīng)病理性疼痛模型CCI建立成功后，腹腔開始注射米諾環(huán)素(40mg/kg)，每24h注射一次，連續(xù)注射到14天為止。分別測定各組在手術前(以第Od表示)以及手術后第1d、4d、7d、11d、14d損傷側(cè)后肢機械刺激縮足閾值，然后相應分別取每組大鼠L<,4-6>段脊髓。采用免疫組化染色方法測定脊髓背角星形膠質(zhì)細胞膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)表達。 結(jié)果： 1．五組大鼠手術前基礎50﹪機

5、械刺激縮足閾值無統(tǒng)計學差異(P>0.5)。A組、B組這二組大鼠各觀測時點損傷側(cè)50﹪機械刺激縮足閾值組內(nèi)及組間比較也無統(tǒng)計學差異(P>0.5)。C組、D組、E組大鼠CCI術后第1d、4d、7d、11d、14d損傷側(cè)50﹪機械刺激縮足閾值分別與術前比較均有不同程度降低(P<0.05或P<0.01)；尤以C組、E組大鼠在CCI術后14d損傷側(cè)50﹪機械刺激縮足閾值顯著降低(P<0.01)。其中D組大鼠與C組、E組術后各觀測時點分別比較，50

6、﹪機械刺激縮足閾值明顯升高(P<0.01)。E組大鼠在確定慢性神經(jīng)病理性疼痛模型CCI建立成功注射米諾環(huán)素后， CCI術后第7d、11d、14d與C組各相應時點比較損傷側(cè)50﹪機械刺激縮足閾值有明顯增高(P<0.05)。 2．免疫組化染色結(jié)果顯示五組大鼠手術前脊髓星形膠質(zhì)細胞GFAP免疫反應陽性細胞的平均光密度基礎值無統(tǒng)計學差異(P>0.5)；A組、B組這二組大鼠各觀測時點GFAP免疫反應陽性細胞的平均光密度值組內(nèi)及組間比較無統(tǒng)

7、計學差異(P>0.5)。C組、D組、E組大鼠CCI術后第4d、7d、11d、14d損傷側(cè)GFAP免疫反應陽性細胞的平均光密度值與術前比較均有不同程度升高(P<0.05或P<0.01)，尤以C組、E組大鼠在CCI術后14d損傷側(cè)GFAP免疫反應陽性細胞的平均光密度值顯著增高(P<0.01)；其中D組與C組、E組CCI術后第4d、7d、11d、14d分別比較， GF-AP免疫反應陽性細胞的平均光密度值均明顯降低(P<0.01)；E組大鼠在確

8、定慢性病理性疼痛模型CCI建立成功注射米諾環(huán)素后， CCI術后第7d、11d、14d與C組各相應時點比較GFAP免疫反應陽性細胞的平均光密度值有明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論: 1．CCI大鼠可以出現(xiàn)不同時程的痛覺過敏，CCI術后中期脊髓的星形膠質(zhì)細胞被激活，其激活增高程度與慢性神經(jīng)病理性疼痛維持過程中機械刺激縮足閾值降低程度平行。 2．米諾環(huán)素的術前給藥能明顯降低脊髓星形膠質(zhì)細胞的激活，從而更為有效減輕CCI