基于DNA條形碼(ITS2)的絞股藍與其混偽品的分子鑒定.pdf

1、[目的]
　　探討基于ITS2序列的鑒定絞股藍與其混偽品的新方法，以確保該藥材的質(zhì)量以及臨床療效。
　　[方法]
　　1.利用PCR測序法，對樣品進行ITS2片段擴增并雙向測序。所得序列經(jīng)CodonCode Aligner拼接后，用CLUSTALX1.83軟件進行多重序列比對及分析。
　　2.通過ITS2數(shù)據(jù)庫預測ITS2二級結(jié)構(gòu)。
　　3.用軟件MEGA4.0進行K2P遺傳距離分析。
　　4.用最大

2、簡約法(MP)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　[結(jié)果]
　　1.絞股藍與其混偽品的ITS2序列存在相當大的差異。
　　2.分析ITS2二級結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，絞股藍與其混偽品在4個螺旋區(qū)的莖環(huán)數(shù)目、大小、位置以及螺旋發(fā)出時的角度均有明顯差異。
　　3.絞股藍最大種內(nèi)K2P(Kimura-2-parameter)遺傳距離遠遠小于其與混偽品的種間K2P遺傳距離。
　　4.由所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹圖可以看出，絞股藍與其混偽品可明顯分開。