CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞移植對(duì)缺血性腦卒中大鼠腦白質(zhì)的保護(hù)作用.pdf

1、目的：⑴構(gòu)建腦缺血/再灌注大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注移植治療模型，探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積和神經(jīng)功能的影響。⑵通過(guò)觀察腦缺血/再灌注大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植后腦白質(zhì)組織學(xué)相關(guān)指標(biāo)，研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)缺血后腦白質(zhì)損傷的作用。
　　 方法：①選用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重275g-300g。將動(dòng)物隨機(jī)分為

2、：正常組(co)、假手術(shù)組(sham)和手術(shù)組。采用改良的Zealonga線栓法對(duì)手術(shù)組大鼠施行大腦中動(dòng)脈阻塞缺血再灌注(MCAO/R)術(shù)。手術(shù)組分為以下三個(gè)亞組：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植組(Treg組)，經(jīng)股靜脈輸注移植2×106個(gè)大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，構(gòu)建調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植治療模型；脾細(xì)胞輸注移植組(SP組)，經(jīng)股靜脈輸注移植同等數(shù)量的脾細(xì)胞；PBS輸注組(PBS組)經(jīng)股靜脈注入等體積的PBS緩沖液。分別在移植術(shù)后24h

3、和72h對(duì)大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)定，術(shù)后72h斷頭取腦，采用TTC染色和圖像分析軟件計(jì)算梗死體積，并對(duì)手術(shù)組腦梗死體積和神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。②選用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重275g-300g。將動(dòng)物隨機(jī)分為：正常組(co)、假手術(shù)組(sham)和手術(shù)組。采用改良的Zealonga線栓法對(duì)手術(shù)組大鼠施行大腦中動(dòng)脈阻塞缺血再灌注(MCAO/R)術(shù)。手術(shù)組分為以下三個(gè)亞組：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植組(Tr

4、eg組)，經(jīng)股靜脈輸注移植2×106個(gè)大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，構(gòu)建調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植模型；脾細(xì)胞輸注移植組(SP組)，經(jīng)股靜脈輸注移植同等數(shù)量的脾細(xì)胞；而在PBS輸注組(PBS組)經(jīng)股靜脈注入等體積的PBS緩沖液。術(shù)后72小時(shí)斷頭取腦，制備腦組織石蠟切片，免疫熒光染色觀察缺血半球寡突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligedendrocytes，OLs)及髓鞘堿性蛋白(MBP)、神經(jīng)絲蛋白200(NF200)標(biāo)記的軸突，并對(duì)OLs數(shù)量及MBP

5、、NF200熒光強(qiáng)度進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：⑴調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植組腦梗死體積及梗死半球體積占健側(cè)體積的比值較SP組和PBS組均顯著減小(p<0.01)；在術(shù)后24h、72h神經(jīng)功能評(píng)分實(shí)驗(yàn)中，Treg組ZeaLonga評(píng)分均顯著低于SP組和PBS組(p<0.01)，24h、72h mNSS評(píng)分見(jiàn)Treg組較SP組和PBS組亦顯著降低(p<0.05)。⑵免疫熒光顯微鏡檢測(cè)腦缺血后腦白質(zhì)相關(guān)指標(biāo)顯示：手術(shù)組缺血半球梗死邊

6、緣區(qū)紋狀體部位MBP、NF200較正常組和假手術(shù)組同側(cè)半球相比，熒光強(qiáng)度顯著降低(p<0.05)，Treg組較SP組、PBS組上述指標(biāo)熒光強(qiáng)度均顯著增強(qiáng)(p<0.05)。觀察各組缺血半球胼胝體部位OLs可見(jiàn)，手術(shù)組較對(duì)照組數(shù)量顯著減少(p<0.01)，Treg組較SP組、PBS組數(shù)量顯著增多(p<0.01)。
　　 結(jié)論：①采用股靜脈輸注移植方式可以成功構(gòu)建出穩(wěn)定的大鼠腦缺血再灌注CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植治療模型。