五加苷元對D-GaIN-LPS誘導的暴發(fā)型肝衰竭的保護作用及其機制初步研究.pdf

1、背景：暴發(fā)性肝衰竭是一種病情嚴重，臨床癥狀復雜的急性肝臟疾病。由于缺乏特效的治療手段，其病死率目前仍高達70％。肝衰竭的主要的病理改變是大量的肝細胞壞死。通常認為，異常增高的免疫反應(yīng)造成的損傷在肝衰竭發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用，其中，TNF-α和IL-1β等早期炎癥介質(zhì)是造成肝細胞損傷的主要炎癥因子。HMGB1是一種存在于細胞核內(nèi)的核蛋白，釋放到細胞外則可介導炎癥反應(yīng)。最近研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1與肝炎的嚴重程度相關(guān)，表明HMGB1可能參與了

2、肝臟疾病的免疫病理過程。中藥“五加皮”常被用于治療風濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病和肝病。有研究報道五加科植物的提取物對肝損傷具有較好的保護作用。五加苷元是新近從五加科植物中提取的一種三萜化合物，體外實驗結(jié)果表明，五加苷元能抑制TNF-α、IL-1β和HMGB1等炎癥因子的釋放。因此，我們通過建立一種肝損傷動物模型，以觀察五加苷元在動物體內(nèi)對TNF-α、IL-1β和HMGB1等炎癥因子釋放的影響以及對肝損傷的保護作用。
　　 方法：(1)暴

3、發(fā)性小鼠肝衰竭模型的建立：6-8周齡的雌性Balb/C小鼠，腹腔內(nèi)注射D-氨基半乳糖(600 mg/kg)和內(nèi)毒素(0.5 mg/kg)聯(lián)合誘導小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型。(2)給予五加苷元預(yù)處理，觀察其對肝衰竭小鼠造模后1.5h TNF-α、IL-1β(ELISA)，8h ALT、AST(生化分析)、和16h HMGB1(Western blot)在血清中的含量，對肝臟組織病理學改變和小鼠生存率的影響；對HMGB1移位和肝細胞凋亡的影響。(

4、3)造模后給予不同劑量五加苷元處理，觀察其對肝衰竭小鼠血清中ALT、AST和HMGB1含量和生存率的影響，并檢測對造模后不同時間點血清中TNF-α和IL-1β含量的影響。(4)造模后不同時間點給予五加苷元處理，觀察其對小鼠血清中HMGB1含量的影響。(5)五加苷元的毒副作用和不良反應(yīng)：正常小鼠給予五加苷元處理后，觀察其對肝腎功能、心肌酶學等的影響以及心、肝、腎和肺組織形態(tài)學的影響。
　　 結(jié)果：(1)小鼠血清中ALT和AST含量

5、在模型組分別為7752.40±343.45 IU/L和8326.72±277.25 IU/L，較正常對照組37.66±27.53 IU/L和97.38±42.36 IU/L明顯升高(P<0.01)，模型組小鼠肝組織失去正常肝小葉結(jié)構(gòu)，肝組織細胞大塊狀壞死，壞死區(qū)內(nèi)可見大量炎性細胞浸潤，提示造模成功。(2)給予不同劑量的五加苷元預(yù)處理，小鼠血清中ALT/AST、TNF-α/IL-1β和HMGB1均出現(xiàn)不同程度的下降，50mg/kg五加苷元

6、預(yù)處理后ALT和AST分別降至6136.18±245.08 IU/L和5791.42±773.90 IU/L；100mg/kg五加苷元預(yù)處理組降至3845.24±264.78 IU/L和4473.92±510.27IU/L，與模型組比較，分別P<0.05和P<0.01；經(jīng)五加苷元預(yù)處理，小鼠肝臟中肝細胞炎癥壞死和結(jié)構(gòu)破壞程度減輕，發(fā)生HMGB1從胞核向胞漿移位的肝細胞數(shù)減少，發(fā)生凋亡的肝細胞也減少；藥物處理各組小鼠的生存率均不同程度地提

7、高，100mg/kg五加苷元處理組小鼠生存率達41.67％(5/12)。(3)在造模后3h給予不同劑量的五加苷元處理后，小鼠血清中ALT，AST和HMGB1水平均出現(xiàn)不同程度的下降，造模后給予五加苷元100mg/kg處理，ALT和AST分別降至6085.47±446.83IU/L和5638.79±510.27IU/L；小鼠的生存率均呈不同程度增加，造模后給予五加苷元100mg/kg處理，小鼠生存率提高至33.33％(4/12)；但其保護

8、作用較預(yù)處理減弱。(4)在造模后3h、6h和12h等不同時間點給予100mg/kg的五加苷元處理后，小鼠血清中HMGB1水平均出現(xiàn)不同程度的下降，但造模后3h下降最明顯。(5)正常小鼠給予五加苷元處理，其肝、腎功能和心肌酶學，及心肝腎肺組織形態(tài)學無明顯改變。
　　 結(jié)論：(1)五加苷元能明顯抑制D-GalN和LPS誘導暴發(fā)性肝衰竭小鼠分泌早期炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β和晚期炎癥介質(zhì)HMGB1，降低血清中炎癥因子的含量；(2)