薯蕷皂苷對撲熱息痛誘導(dǎo)肝損傷的保護作用研究.pdf

1、目的:
　　 研究薯蕷皂苷對撲熱息痛誘導(dǎo)肝損傷的保護作用，并探討其可能的分子作用機制。
　　 方法:
　　 在體外實驗中，薯蕷皂苷預(yù)處理HepG2細胞6小時后再用10mMAPAP處理24小時，MTT法檢測細胞活力，測定GSH和AST含量;JC-1和透射電鏡檢測線粒體膜電位和觀察線粒體形態(tài);TUNEL、AO/EB、DAPI熒光染色和單細胞凝膠電泳檢測細胞凋亡和壞死情況。在體內(nèi)實驗中，小鼠口服薯蕷皂苷(25、50和1

2、00mg/kg)5天后給予APAP來考察薯蕷皂苷對急性肝損傷的保護作用，以水飛薊素（200mg/kg）為陽性對照。測定了ALT、AST、MDA、GSH、GSSG和肝臟指數(shù);組織病理學(xué)結(jié)合TUNEL、AO/EB和DAPI熒光分析考察肝細胞的壞死和凋亡;JC-1檢測線粒體膜電位，透射電鏡觀察線粒體形態(tài)，并檢測了線粒體內(nèi)心磷脂、Ca2+含量以及Ca2+-ATP酶(ATP2A2)的表達。在分子機制研究方面，用二維凝膠電泳結(jié)合MALDI-TOF/

3、TOF-MS/MS技術(shù)探討不同組別小鼠肝臟差異蛋白表達，并采用westernblot、酶聯(lián)免疫法(ELISA)和免疫組織化學(xué)法(IHC)等方法驗證了相關(guān)差異蛋白。最后考察薯蕷皂苷對線粒體相關(guān)蛋白(CYP2E1、Bax、p53、Bak、Bcl-2和Bid)表達的影響。
　　 結(jié)果:
　　 實驗結(jié)果顯示，薯蕷皂苷在體外可以抑制APAP誘導(dǎo)的HepG2細胞活力下降、AST釋放、線粒體膜電位下降以及細胞凋亡和壞死。
　　

4、 薯蕷皂苷可以顯著抑制APAP引起小鼠肝臟ALT(2507±484vs.233±86U/L)和AST(702±184vs.106±57U/L)活性的升高，逆轉(zhuǎn)APAP誘導(dǎo)的肝臟MDA含量升高，GSSG升高和GSH降低，并降低小鼠的肝臟指數(shù)，減輕APAP造成的肝細胞壞死和凋亡。薯蕷皂苷還可保護線粒體形態(tài)完整、穩(wěn)定線粒體膜電位（76±11vs.102±6RFU）、升高線粒體內(nèi)心磷脂、降低Ca2+含量（22.2±0.7vs.14.5±0.9R

5、FU）以及上調(diào)Ca2+-ATP酶(ATP2A2)表達(4.93倍)，在100mg/kg給藥劑量時的藥效強于給藥劑量為200mg/kg水飛薊素產(chǎn)生的藥效。經(jīng)蛋白組學(xué)技術(shù)從小鼠肝臟中鑒定出15個表達差異蛋白，并驗證了其中的亞硫酸鹽氧化酶(sulfiteoxidase，Suox)、過氧化物還原酶-1(peroxiredoxin-1，Prdx1)、衰老標(biāo)記蛋白(regucalcin，Rgn)、角蛋白18(cytoskeletal18，Krt18

6、)、蘋果酸脫氫酶(malatedehydrogenase，Mdh1)和嘌呤核苷酸磷酸化酶(purinenucleosidephosphorylase，Pnp)六個差異蛋白的表達。與模型組相比，薯蕷皂苷可以顯著上調(diào)Suox、Prdx1和Rgn蛋白表達（1.65、20.2和1.46倍），升高肝臟中Mdh1和Pnp的含量(p＜0.01)，下調(diào)Krt18蛋白表達（1.53倍）。進一步的研究表明薯蕷皂苷可以下調(diào)CYP2E1、p53、BAK和Bax