紅毛五加總苷抗凝作用的研究.pdf

1、紅毛五加(Acanthopanax giraii Harms)作為藥用植物已有悠久的歷史，具有祛風除濕、活血化淤的功效。現(xiàn)代藥理學研究證實，紅毛五加皮中含有多糖類、嘌呤類、皂苷類及萜類物質(zhì)，而苷類主要為刺五加苷類，尤以刺五加苷E、B為多。其藥理作用廣泛，已證實具有抗心律失常、抗缺氧、抗腫瘤、抗炎、增強機體免疫力、鎮(zhèn)痛、抗輻射、抗病毒、保肝等作用。 血栓栓塞性疾病是一類嚴重危害人類健康和生命的疾病。祖國醫(yī)學認為血栓屬于血淤范疇，中

2、醫(yī)的血淤與血小板高聚集狀態(tài)、血液循環(huán)障礙及血栓形成有關；而活血化淤則與抑制血小板功能、改善血液循環(huán)障礙，防止血栓形成或溶解血栓有著密切的關系。 本實驗首次選用具有活血化淤功效的紅毛五加醇提物即紅毛五加總苷(Total Glucosides of Acanthopanax Giraldii，TGA)進行抗凝作用的初步研究，以期望研制一種天然、安全、適用范圍廣的新型抗凝藥物，指導臨床預防及治療血栓性疾病。 實驗分兩部分

3、 目的：從紅毛五加莖皮中提取TGA并控制其質(zhì)量方法： 第一部分紅毛五加總苷的提取及其質(zhì)量控制 1.將紅毛五加藥材粉碎，經(jīng)乙醇浸泡，減壓蒸-T濾液，氯化鈉溶解、正丁醇萃取、正丁醇相減壓蒸干、真空干燥等步驟得到浸膏樣物質(zhì)。 2.高效液相分析以乙腈-水(19：81)為流動相，以Diamonsil C<,18>柱(5μm4.6mm×250mm)為固定相，檢測波長為220 nm，柱溫22℃。 3.以刺五加苷E作為

4、質(zhì)量控制標準，測定不同提取條件所得TGA中刺五加苷E含量，優(yōu)化提取過程。 結果： 1.經(jīng)Molish反應和Libatman反應鑒定，確認提取物為總苷。 2.刺五加苷E線性范圍為2.0～40.0 μg/ml，平均回收率為100.13﹪，RSD﹪為0.34﹪。 結論： 1.紅毛五加總苷提取率為0.17﹪，TGA中刺五加苷E含量為4.67﹪。 2.方法可靠，簡單可行，為控制TGA的內(nèi)在質(zhì)量提供了

5、科學依據(jù)。 第二部分紅毛五加總苷抗凝作用的研究 目的：研究TGA對大鼠、小鼠血小板聚集功能、凝血時間，大鼠凝血活性的影響及TGA對小鼠血小板聚集、凝血時間影響的時效關系。 方法： 1.體外作用研究：將不同濃度(終濃度分別為10 mg/L，20 mg/L，100 mg/L)的TGA與SD大鼠全血孵育，加入花生四烯酸、腎上腺素和二磷酸腺苷，觀察TGA對血小板聚集的影響。 2.體內(nèi)作用研究： 2

6、.1.TGA200，100，50 mg/kg·d×7 d灌胃給藥后，分別檢測由花生四烯酸、腎上腺素和二磷酸腺苷誘導的SD大鼠、昆明種小鼠全血血小板聚集。 2.2.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7 d灌胃給藥后，檢測SD大鼠的凝血活性(凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間、凝血酶時間和纖維蛋白原含量)。 2.3.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7 d灌胃給藥后，分別檢測SD大鼠及昆明種小鼠的凝血

7、時間。 2.4.TGA 100 mg/kg灌胃給予昆明種小鼠，分別與用藥后0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，6，8，12 h檢測凝血時間及花生四烯酸誘導的全血血小板聚集阻抗值。 結果： 1.TGA 10 mg/L，20 mg/L，100 mg/L對SD大鼠體外分別由AA，腎上腺素，ADP誘導的全血血小板聚集有抑制作用，且隨劑量增加，抑制作用逐漸增強。 2.TGA 200，100，50 mg/kg

8、·d ×7d灌胃給藥，對SD大鼠和昆明種小鼠分別由AA，腎上腺素，ADP誘導的全血血小板聚集有抑制作用，且隨劑量增加，抑制作用逐漸增強。 3.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7d灌胃給藥，可明顯延長SD大鼠凝血酶原時間，活化部分凝血酶時間及凝血酶時間，減少纖維蛋白原含量，且隨劑量增加，作用逐漸增強。 4.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7d灌胃給藥，均明顯延長SD大鼠與昆明種小鼠的凝血時間，且

9、隨劑量增加，延長作用更加明顯。 5.TGA 100 mg/kg灌胃給藥后1.5 h小鼠凝血時間明顯延長，可維持約2.5h；給藥后1h即可對花牛四烯酸誘導的全血血小板聚集出現(xiàn)抑制作用，可維持約11h。 結論： 1.TGA體內(nèi)外用藥均可通過抑制血小板聚集而達到抗凝作用；其抑制作用廣譜，對花生四烯酸、腎上腺素、二磷酸腺苷三條誘導途徑均有作用。 2.TGA體內(nèi)用藥可明顯延長大鼠凝血酶原時間，活化部分凝血酶時間及凝