健康成人乙型肝炎病毒疫苗接種后無應(yīng)答者免疫功能研究.pdf

1、目的：通過對(duì)乙型肝炎病毒疫苗接種后不同免疫應(yīng)答人群T細(xì)胞亞群、T調(diào)節(jié)細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞在PHA和HBsAg干預(yù)前后Foxp3 mRNA的表達(dá)和細(xì)胞因子分泌情況的檢測(cè)，探討乙型肝炎病毒疫苗接種后免疫應(yīng)答與T細(xì)胞亞群活化、免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞和細(xì)胞因子之間的內(nèi)在聯(lián)系。
　　 方法：對(duì)1024名大專生乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行初篩，選取其中無任何血清學(xué)標(biāo)志物的個(gè)體進(jìn)行常規(guī)重組酵母乙型肝炎病毒疫苗接種，全程接種完后45日行HBV血清學(xué)檢查

2、。選取其中18例乙型肝炎病毒疫苗接種后HBsAb陽(yáng)性者作為應(yīng)答組，22例乙型肝炎病毒疫苗接種HBsAb陰性者作為無應(yīng)答組，10例未接受乙型肝炎病毒疫苗接種的健康對(duì)照者作為對(duì)照組。采集不同反應(yīng)人群全血，用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其外周血單核細(xì)胞的表面標(biāo)志物：CD69、CD4、CD8、CD25等進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算不同T細(xì)胞亞群百分比，如CD69+、CD4+、CD8+T細(xì)胞百分比及CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞在P

3、HA和HBsAg刺激前后Foxp3 mRNA的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同反應(yīng)人群外周血單個(gè)核細(xì)胞PHA和HBsAg刺激后IL-4、IL-12、IL-18、IFN-γ的分泌情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)2006級(jí)大專生1024人，其中血清無任何標(biāo)志物的有405人，乙型肝炎病毒攜帶率為1.7％。全程接種乙型肝炎病毒疫苗后乙肝血清學(xué)顯示：男、女生無、弱應(yīng)答率之間無顯著性差異；約65％免疫應(yīng)答個(gè)體的乙

4、肝表面抗體滴度屬于高反應(yīng)組。
　　 2.應(yīng)答組、無應(yīng)答組、對(duì)照組CD4+CD69+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為1.81±1.33％、0.64±0.48％、和0.56±0.39％，應(yīng)答組CD4+T細(xì)胞中CD69的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(p<0.01)，也明顯高于無應(yīng)答組。但無應(yīng)答組與對(duì)照組間差異無顯著性意義(p>0.05)。各組CD8+CD69+T細(xì)胞占CD8±T細(xì)胞的百分比分別為0.43±0.25％、3.05±1.69％、和

5、3.11±2.41％，應(yīng)答組與對(duì)照組和無應(yīng)答組比較，差異均有非常顯著性意義(p<0.01)。
　　 3.應(yīng)答組、無應(yīng)答組、對(duì)照組CD3+CD4+T細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞的百分比分別為50.84±6.36％、53.67±6.68％和51.02±9.30％，各組結(jié)果比較，差異沒有顯著性意義(p>0.05)；各組CD3+CD8+T細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞的百分比分別為41.02±4.41％、42.69±7.35％、和42.36±8.34％，

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間結(jié)果的差異無顯著性意義(p>0.05)。
　　 4.應(yīng)答組、無應(yīng)答組、對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為0.59±0.46％、0.77±0.40％、和1.30±1.44％，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間結(jié)果的差異無顯著性意義(p>0.05)。
　　 5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)應(yīng)答組、無應(yīng)答組、對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞Foxp3的表達(dá)。PHA和HBsAg刺激前，F(xiàn)oxp3的表達(dá)在應(yīng)答組和無應(yīng)

7、答組、對(duì)照組相比，其差異有顯著性意義(p<0.05)。在PHA和HBsAg刺激后應(yīng)答組和無應(yīng)答組相比，p=0.111(P>0.05)，兩者之間沒有顯著性差異；應(yīng)答組與對(duì)照組相比，兩者之間存在顯著性差異(p<0.05)。
　　 6.應(yīng)答組、無應(yīng)答組、對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)PHA和HBsAg刺激后應(yīng)答組與無應(yīng)答組、應(yīng)答組與對(duì)照組IFN-γ的濃度相比較，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；應(yīng)答組與無應(yīng)答組，應(yīng)答組與對(duì)照組IL-18

8、、IL-4、IL-12的濃度相比較，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.20μg每次全程乙型肝炎病毒疫苗接種后無應(yīng)答率為5.5％，在應(yīng)答人群中，弱應(yīng)答率為13％，中應(yīng)答率為22％，強(qiáng)應(yīng)答率為65％。
　　 2.乙型肝炎病毒疫苗接種后無應(yīng)答與Th細(xì)胞早期活化不足、Ts細(xì)胞活化增加有關(guān)。
　　 3.CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞在一定程度上參與了乙肝疫苗接種應(yīng)答的負(fù)性調(diào)