癲癇模型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘改變及其對癲癇治療意義的研究.pdf

1、目的：
　　癲癇是一種慢性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，主要以反復出現(xiàn)的自發(fā)性發(fā)作為特點。同時，這種自發(fā)性再發(fā)作在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病中又有一個較高的發(fā)生率。并且，國際上有報道提示在一些癲癇患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)生了脫髓鞘改變。上述現(xiàn)象提示脫髓鞘改變與癲癇發(fā)作之間存在著某種聯(lián)系，但是，目前尚沒有確鑿的實驗證據(jù)來支持二者之間的聯(lián)系。本研究希望通過建立大鼠急慢性癲癇模型、腦電監(jiān)測、免疫蛋白定量分析，酶聯(lián)免疫吸附試驗測定和免疫組織化學等方法，檢測

2、癲癇發(fā)作是否可以使模型動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)作髓鞘改變，進而探討其可能的發(fā)生機制和對癲癇發(fā)作的影響。
　　方法：
　　1．急性青霉素癲癇模型中髓鞘改變的研究：通過單次皮層內(nèi)注射青霉素建立SD大鼠急性癲癇模型，以行為學和腦電監(jiān)測確定模型成功后，通過WesternBlot方法檢測模型大鼠海馬與大腦皮層的髓鞘堿性蛋白（MBP），來觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘改變情況。
　　2．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘改變的研究：通過系統(tǒng)性給予大鼠腹

3、腔注射閾下劑量的戊四氮（PTZ）建立慢性癲癇模型，以行為學和腦電監(jiān)測確定模型成功后，通過在2周、4周和6周三個時間點進行WesternBlot檢測模型大鼠海馬與大腦皮層的MBP，來觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘有無破壞。
　　3．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘改變發(fā)生機制的研究：通過免疫組織化學熒光染色檢測正常與模型組大鼠海馬與大腦皮層是否存在NG2陽性細胞表達差異，以期觀察髓鞘改變與少突膠質(zhì)細胞的可能關(guān)系；通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢

4、測正常與模型組大鼠血清中抗MBP抗體的水平，以期觀察髓鞘改變與免疫反應(yīng)的可能關(guān)系；通過在2周、4周和6周三個時間點觀察正常與模型組大鼠尾靜脈注射伊文氏藍（EB）后海馬與大腦皮層腦組織切片血腦屏障（BBB）通透性的變化，以期觀察髓鞘改變與BBB損傷的可能關(guān)系；綜合以上方法闡明PTZ誘導大鼠慢性癲癇發(fā)作過程中髓鞘破壞的發(fā)生機制。
　　4．脫髓鞘治療藥物癲癇發(fā)作預防作用的研究：通過預防性給予治療劑量脫髓鞘疾病免疫調(diào)節(jié)劑醋酸格拉替雷（GA

5、），觀察系統(tǒng)給藥后由PTZ誘導的大鼠慢性癲癇發(fā)作行為學表現(xiàn)和腦電監(jiān)測結(jié)果的變化，進而探討藥物對抗髓鞘破壞在癲癇發(fā)作中的保護作用。
　　結(jié)果：
　　1．急性青霉素癲癇模型中髓鞘未受影響：行為學和腦電記錄結(jié)果顯示青霉素成功誘導大鼠急性癲癇發(fā)作，但是WesternBlot結(jié)果顯示模型組大鼠海馬與大腦皮層未觀察到MBP的表達變化，說明青霉素急性癲癇模型中髓鞘未受到影響。
　　2．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘發(fā)生破壞：行為學和腦電記

6、錄結(jié)果顯示PTZ成功誘導大鼠慢性癲癇發(fā)作，隨著PTZ給藥時間的延長，癲癇發(fā)作的程度加重、頻率增高。2周、4周和6周三個時間點的WesternBlot檢測結(jié)果發(fā)顯示，模型組大鼠海馬與大腦皮層的MBP表達均較正常對照組減少，但是三個時間點之間的模型組MBP表達沒有統(tǒng)計學差異，說明髓鞘在PTZ誘導的大鼠慢性癲癇發(fā)作過程早期即發(fā)生破壞性改變。但是，這種改變并沒有隨著PTZ誘導癲癇發(fā)作的加重而進一步惡化。
　　3．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘破

7、壞的可能機制：通過免疫組織化學熒光染色方法，本研究證實PTZ誘導大鼠慢性癲癇發(fā)作早期出現(xiàn)的髓鞘破壞不是繼發(fā)于少突膠質(zhì)細胞本身的破壞；而PTZ誘導大鼠慢性癲癇發(fā)作過程中出現(xiàn)血腦屏障通透性增高和外周血液循環(huán)中產(chǎn)生針對大鼠自身中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抗MBP抗體，這兩項結(jié)果提示自身免疫反應(yīng)可能是PTZ誘導大鼠慢性癲癇過程中髓鞘破壞的原因。
　　4．GA對PTZ誘導的大鼠慢性癲癇發(fā)作的預防治療效果：在2周、4周和6周三個時間點對大鼠行為學觀察統(tǒng)計結(jié)

8、果顯示，GA預防治療組大鼠的癲癇發(fā)作頻率均低于對照組，并且三個時間點之間癲癇發(fā)作頻率沒有顯著差別，說明GA將癲癇發(fā)作控制在較低水平；但是，腦電圖監(jiān)測結(jié)果顯示，GA治療組的自發(fā)性癲癇樣放電與對照組之間沒有統(tǒng)計學差異，說明GA對PTZ誘導的大鼠慢性癲癇發(fā)作的自發(fā)性癲癇放電沒有影響。
　　結(jié)論：
　　1．通過觀察急慢性癲癇模型中的MBP的變化，本研究首次發(fā)現(xiàn)青霉素誘導大鼠急性癲癇發(fā)作中未存在髓鞘破壞，而PTZ誘導大鼠慢性癲癇發(fā)作中