抗IgE中和抗體表位篩選.pdf

1、本實驗中，以抗人IgEmAb為靶蛋白，從噬菌體呈現隨機線性七肽庫篩選與之結合的肽，經過三輪生物淘篩和噬菌體ELISA，我們獲得了48個陽性重組噬菌體克隆。通過結合力排序，對其中15個顯示與抗人IgEmAb有較強結合能力的克隆進行DNA測序。測序結果得到：10個噬菌體克隆為DHIDMGL，1個噬菌體克隆為DHMWLGL，3個噬菌體克隆為DHQDAGF，1個是噬菌體DHMDQNL。網上蛋白BLAST未發(fā)現有已知的相同序列。用多序列比對程序C

2、LUSTALW進行序列比對及與IgE的比較。發(fā)現篩得的7肽序列有相似的骨架區(qū)和同源性，并與IgE的CH3區(qū)有較高同源性。競爭性ELISA結果顯示4個序列均能與IgE競爭性結合抗人IgEmAb，說明篩選所得7肽可與抗人IgEmAb特異性結合。并直接以重組噬菌體免疫小鼠，獲得的小鼠抗血清點雜交結果顯示有抗IgE mAb的產生。為了進一步證明篩選得到的序列在脫離了噬菌體之后仍具有與抗人IgEmAb結合的能力，應用MAP合成肽，KLH合成肽，