REGγ對甲狀腺癌分化程度的影響及相關信號通路的初步研究.pdf

1、甲狀腺癌（thyroid cancer）分為分化型和未分化型兩大類。對于分化型甲狀腺癌（differentiated tyroid cancer,DTC），術后放射性碘治療過程中腫瘤細胞逐漸地失去攝碘能力，發(fā)生失分化現(xiàn)象，如何使癌細胞再分化是研究的熱點和難點；對于未分化型甲狀腺癌（anaplastic thyroid cancer,ATC），如何使未分化的癌細胞發(fā)生分化以便用放射性碘治療和如何減慢腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力，是目前面臨的一大難題

2、。
　　通過閱讀大量文獻，我們得出REGγ基因與甲狀腺癌的惡性程度相關，進而推測其可能與甲狀腺癌的分化和轉(zhuǎn)移相關。本研究通過沉默甲狀腺癌細胞株（ARO、WRO）中的 REGγ基因，觀察分化相關基因（鈉碘轉(zhuǎn)運體、甲狀腺特異轉(zhuǎn)錄因子-1、甲狀腺激素受體、配對盒基因-8) mRNA和蛋白質(zhì)表達的變化情況，及新鮮甲狀腺癌標本中REGγ和細胞中E-cadherin的表達情況，由此初步提出REGγ對甲狀腺癌分化程度和轉(zhuǎn)移的影響，并通過Real

3、-time PCR測定相關基因mRNA的表達，進行了REGγ發(fā)揮作用的相關信號通路的初步研究。
　　第一部分REGγ與甲狀腺癌細胞的分化程度相關
　　目的：檢測甲狀腺癌細胞株（ARO和WRO）沉默REGγ后是否出現(xiàn)分化相關基因表達增高的現(xiàn)象，即出現(xiàn)再分化現(xiàn)象。
　　本文通過體外培養(yǎng)沉默REGγ前后的甲狀腺癌ARO及WRO細胞株，測定甲狀腺細胞分化相關基因(NIS、TSHR、TTF-1、Pax-8)mRNA和蛋白質(zhì)水平的

4、變化，初步探討REGγ對甲狀腺癌細胞分化程度的影響。
　　方法：培養(yǎng)的AROshN、AROshR、WROshN及 WROshR細胞株，利用實時熒光聚合酶鏈反應（Real-time PCR）和蛋白印跡（Western-blot）實驗檢測上述基因mRNA和蛋白水平的變化。
　　結果：兩細胞株中，沉默REGγ組與未沉默組相比，NIS、TSHR、TTF-1、Pax-8 mRNA表達均增高。在WRO細胞中，TSHR和Pax-8的增高差

5、異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；ARO細胞中，NIS和TTF-1的增高差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。同時NIS蛋白表達水平也增高。
　　結論：沉默REGγ后，ARO、WRO細胞中NIS、TSHR、TTF-1、Pax-8 mRNA和NIS蛋白水平上升，推測沉默REGγ后可以使甲狀腺癌細胞出現(xiàn)再分化。
　　第二部分REGγ在乳頭狀甲狀腺癌組織中的表達及臨床意義
　　目的：本文旨在探討REGγ在乳頭狀甲狀腺癌組織中的

6、表達及其與各臨床因素的相關性。
　　方法：應用免疫組織化學方法檢測REGγ在乳頭狀甲狀腺癌組織中的表達及Realtime-PCR方法檢測REGγ在甲狀腺乳頭狀癌和癌灶旁組織中的表達，分析REGγ與臨床因素的相關性及其在癌灶與癌灶旁組織中的表達差異。
　　結果： REGγ蛋白在乳頭狀甲狀腺癌組織中表達明顯增高，且其陽性率為75.9％(41/54)，REGγ表達與臨床分期、淋巴結轉(zhuǎn)移情況有關（P=0.023、0.001＜0.05

7、）。REGγ mRNA在癌灶旁組織比癌灶中表達增高，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.006＜0.05）。
　　結論： REGγ的陽性表達可作為乳頭狀甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的生物學指標，可為臨床診斷、治療及判斷預后提供參考。
　　第三部分REGγ發(fā)揮作用的相關信號通路的初步研究
　　目的：本文旨在初步探討REGγ在ARO和WRO細胞株中發(fā)揮作用的相關信號通路。
　　方法：應用Realtime-PCR方法篩選常見信號通路

8、如：Shh、Wnt和Notch信號通路相關基因Shh、Ptch、smo、Wnt、GSK-3β、β-catenin和Notch1在沉默REGγ前后的ARO和WRO細胞株中的表達，初步探討REGγ在ARO和WRO細胞株中發(fā)揮作用的信號通路。
　　結果：在ARO細胞中，沉默REGγ后，Shh信號通路的mRNA表達均降低，Shh表達降低差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Wnt信號通路Wnt mRNA表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.

9、05）；GSK-3β和β-catenin的mRNA表達量增高，GSK-3β的表達增高差異具有統(tǒng)計學意義。Notch信號通路Notch1 mRNA表達量增加，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。在WRO細胞中，沉默REGγ后，Shh信號通路和Wnt信號通路基因表達均增高，Notch信號通路中Notch1 mRNA表達量增加，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.061＞0.05）。
　　結論：在ARO細胞株中，REGγ可能通過Shh、Wnt和No