華南部分地區(qū)PRRSV流行病學(xué)調(diào)查及Nsp1α和Nsp1β的原核表達(dá).pdf

1、為了了解華南地區(qū)PRRSV的遺傳變異情況及抗體水平，本實(shí)驗(yàn)對(duì)2014-2015年間收集的華南部分地區(qū)的豬血清和病料分別進(jìn)行PRRSV抗體和抗原的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果表明：2014共采集5046份豬血清，其中PRRSV抗體陽(yáng)性血清為4195份，陽(yáng)性率為83.13％（4195/5046）；95%置信區(qū)間為82.67%-83.59%；2015年共采集5531份血清，經(jīng)檢測(cè)PRRSV陽(yáng)性血清共3992份，陽(yáng)性率為72.18%（3992/5531），9

2、5%置信區(qū)間為70.38%-72.4%；2014年共采集病料583份，其中 PRRSV檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本為192份，陽(yáng)性率為33.01%（192/583），95%置信區(qū)間為32.78%-33.23%；2015年共采集病料964份，PRRSV檢測(cè)陽(yáng)性的樣本數(shù)為356，陽(yáng)性率為36.88%（356/964），95%置信區(qū)間為36.56%-37.2%，與2014年比較，2015年檢測(cè)的PRRSV抗體陽(yáng)性率有所下降而抗原的陽(yáng)性率有所上升。

3、　　研究又對(duì)PRRSV陽(yáng)性樣本進(jìn)行Nsp2和GP5基因的擴(kuò)增，成功地獲得31條Nsp2序列和64個(gè)GP5序列，分析比對(duì)Nsp2和GP5基因的氨基酸序列后發(fā)現(xiàn)：其中26株P(guān)RRSV的Nsp2基因依然是29+1個(gè)氨基酸缺失，但也存在著其他形式的氨基酸位點(diǎn)的缺失。與參考毒株相比，GP5基因存在著廣泛的氨基酸位點(diǎn)的突變，主要的突變區(qū)域?yàn)樾盘?hào)肽區(qū)、第一高變區(qū)以及第二高變區(qū)。GP5的遺傳進(jìn)化樹(shù)結(jié)果表明：華南地區(qū)同時(shí)存在著歐洲型和北美型PRRSV，北

4、美型PRRSV進(jìn)一步分為6個(gè)亞群，華南地區(qū)主要流行的亞群是以JXA1為代表的Subgenotype I亞群和以GM2為代表的Subgenotype VI亞群，近幾年新出現(xiàn)的NADC30-like亞群毒株在華南地區(qū)也有出現(xiàn)。
　　分離、鑒定了10株P(guān)RRSV，10株P(guān)RRSV相互之間的核苷酸同源性為92.6%-97.5%，與JXA1、VR2332及CH-1R毒株的核苷酸同源性分別為95.3%-98.9%、87.8%-89.15%、9

5、1.5%-94.9%?；谌蚪M的遺傳進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示10株P(guān)RRSV除FJXM毒株屬于過(guò)渡亞群Intermediate subgroup外，其余均屬于以JXA1為代表的JXA1-like亞群，彼此之間的親緣關(guān)系較為密切。與參考毒株相比，部分毒株的GP3、GP5、GP6蛋白的抗原位點(diǎn)發(fā)生了氨基酸位點(diǎn)的突變。
　　研究還對(duì)PRRSV的Nsp1α及Nsp1β基因進(jìn)行擴(kuò)增，將其連接到pET-28a表達(dá)載體后轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)，經(jīng)West