紅景天苷對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞和吊尾應(yīng)激小鼠睪酮分泌的影響及藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、目的：研究紅景天苷（salidroside）對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞、吊尾應(yīng)激小鼠睪酮分泌的影響，考察不同劑量紅景天苷在大鼠體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過(guò)程。
　　 方法：（1）將雄性大鼠斷頭處死后，立即摘取睪丸，剝離包膜，用Ⅱ型膠原酶消化。取睪丸間質(zhì)細(xì)胞混懸液或含垂體組織塊間質(zhì)細(xì)胞懸液分別加入不同濃度的紅景天苷（終濃度10-4、10-5、10-6和10-7 mol/L）或/和氫化可的松（終濃度10-6 mol/L）體外培養(yǎng)3h，用放免法（RIA）測(cè)

2、定培養(yǎng)基中睪酮含量；（2）昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為對(duì)照組、應(yīng)激組、紅景天苷高劑量組（ig.60mg/kg）、中劑量組（ig.30mg/kg）和低劑量組（ig.15mg/kg）。采用懸吊應(yīng)激模型，除對(duì)照組外各組小鼠連續(xù)重復(fù)懸吊應(yīng)激11d，每天應(yīng)激一次，并循序增加應(yīng)激強(qiáng)度，每次應(yīng)激前30min給予相應(yīng)劑量的紅景天苷或生理鹽水，并于末次應(yīng)激結(jié)束30min后眼眶取血，用RIA測(cè)定血清中睪酮含量。摘取脾臟、胸腺、腎上腺和睪丸，稱重并計(jì)算臟器指數(shù)

3、，其中小鼠左側(cè)腎上腺和睪丸用4％多聚甲醛固定并制作組織切片，HE染色，于顯微鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化；（3）健康雄性SD大鼠尾靜脈注射不同劑量紅景天苷（15、30、60mg/kg）后，按規(guī)定時(shí)間從眼眶靜脈叢取血0.50ml，離心取血清用高氯酸沉淀蛋白，取上清液進(jìn)行HPLC測(cè)定。色譜條件：色譜柱為VP-ODS柱SHIMADZU C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水-三乙胺-冰醋酸（10：90：0.011：0.016，V：V

4、：V：V），流速為1.5ml/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm，柱溫50℃，進(jìn)樣量10μl，內(nèi)標(biāo)：咖啡因。并對(duì)所建立的方法進(jìn)行方法學(xué)確證。測(cè)得的紅景天苷峰面積用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成血藥濃度，繪制不同給藥劑量下紅景天苷的血藥濃度-時(shí)間曲線圖，并用3P97藥物動(dòng)力學(xué)程序計(jì)算藥物在大鼠體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 （1）體外研究結(jié)果表明，間質(zhì)細(xì)胞用含1％乙醇的DMEM培養(yǎng)基孵育時(shí)，乙醇對(duì)睪酮的分泌無(wú)影響；各個(gè)濃度的紅景天苷

5、均能顯著刺激間質(zhì)細(xì)胞睪酮的基礎(chǔ)分泌，各個(gè)濃度的紅景天苷對(duì)睪酮分泌的影響無(wú)濃度依賴關(guān)系；濃度為10-5和10-6mol/L的氫化可的松均可促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的基礎(chǔ)睪酮分泌，但睪酮分泌水平無(wú)顯著性差異；間質(zhì)細(xì)胞經(jīng)紅景天苷預(yù)處理后，再加入氫化可的松共培養(yǎng)時(shí)，間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌增加，但是與單用紅景天苷相比，睪酮分泌水平無(wú)差異；間質(zhì)細(xì)胞與垂體共培養(yǎng)后間質(zhì)細(xì)胞睪酮基礎(chǔ)分泌顯著增加，加入不同濃度紅景天苷后對(duì)睪酮分泌沒(méi)有顯著影響；垂體和間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)條件下氫化

6、可的松可顯著抑制間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌，但細(xì)胞經(jīng)紅景天苷預(yù)處理后可顯著逆轉(zhuǎn)氫化可的松所引起的睪酮分泌下降。
　　 （2）在體研究顯示，應(yīng)激后小鼠體重增長(zhǎng)程度明顯受抑，脾臟指數(shù)下降，腎上腺指數(shù)上升，腎上腺皮質(zhì)肥厚，髓質(zhì)萎縮甚至消失，且應(yīng)激組小鼠血漿睪酮水平顯著低于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)每次應(yīng)激前30min給予低劑量紅景天苷可使應(yīng)激導(dǎo)致的體重增加減緩、腎上腺指數(shù)上升、腎上腺皮質(zhì)肥厚及髓質(zhì)萎縮等病理性改變減輕，睪酮恢復(fù)至正常水平。但紅景天苷中劑

7、量組和高劑量組上述作用不顯著。
　　 （3）高效液相色譜法測(cè)定紅景天苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A樣|A標(biāo)=0.1041C+0.0924.（r=0.9991，n=7），紅景天苷濃度在0.50～80.00μg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好，以信號(hào)/噪音=3：1計(jì)算，紅景天苷的最低檢測(cè)濃度為O.15μg/ml，其中濃度為5、20、80μg/ml血清樣品的日內(nèi)精密度分別4.82％、1.84％和1.70％，日間精密度分別為4.15％、1.83％和1.54％

8、，血清樣品的平均回收率為（98.54±4.12）％。所得血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)3P97藥物動(dòng)力學(xué)程序處理，根據(jù)藥動(dòng)學(xué)房室模型的判斷方法，初步判定靜脈注射后紅景天苷在體內(nèi)大鼠的過(guò)程符合二室模型。低、中、高劑量下紅景天苷的分布半衰期（T1/2α）分別為4.96、2.01和4.36min，消除半衰期（T1/2β）分別為24.24、19.40和16.88min。AUC0-∞和AUC0-∞隨著劑量的增加均呈線性增加，其中AUC0-t和AUC0-∞分

9、別為362.15、879.77、1421.48和383.09、884.52、1426.63μg-min/ml。
　　 結(jié)論：
　　 （1）氫化可的松可顯著抑制垂體存在條件下間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌，提示應(yīng)激所產(chǎn)生的高水平的GCs可能通過(guò)影響垂體促性腺激素如LH等的釋放對(duì)間質(zhì)細(xì)胞睪酮水平產(chǎn)生影響。紅景天苷可促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的基礎(chǔ)睪酮分泌，且該作用不受氫化可的松影響；在垂體與睪丸間質(zhì)細(xì)胞共孵育條件下，紅景天苷對(duì)垂體刺激下間質(zhì)細(xì)胞睪酮的

10、分泌無(wú)影響；而當(dāng)間質(zhì)細(xì)胞用紅景天苷預(yù)培養(yǎng)30min后再加入氫化可的松時(shí)，培養(yǎng)基中睪酮水平上升，提示紅景天苷與垂體所分泌的促性腺激素?zé)o協(xié)同作用，且紅景天苷可拮抗氫化可的松所引起的睪酮水平的下降，該作用可能是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性拮抗糖皮質(zhì)激素或者同時(shí)增強(qiáng)11β-HSD活性從而加速糖皮質(zhì)激素分解來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其確切機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。
　　 （2）低劑量紅景天苷可顯著改善應(yīng)激小鼠體重增加減緩、腎上腺指數(shù)升高、腎上腺皮質(zhì)肥厚、髓質(zhì)萎縮和結(jié)構(gòu)層次模