舌下含服塵螨疫苗免疫療法對(duì)哮喘小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞及NF-κB的影響.pdf

1、目的： 通過(guò)對(duì)哮喘模型小鼠舌下含服塵螨疫苗進(jìn)行治療，研究治療前后樹(shù)突狀細(xì)胞和NF—κ B在頜下淋巴結(jié)和肺部的變化，比較高劑量疫苗和低劑量疫苗對(duì)哮喘小鼠的療效。探討舌下含服粉塵螨疫苗治療哮喘的機(jī)制。 方法： 1、28只4～6周齡SPF級(jí)Bal/c小鼠分成正常對(duì)照組、哮喘模型組、高劑量粉塵螨疫苗治療組和低劑量粉塵螨疫苗治療組。正常對(duì)照組不做處理，其余組在0，7，14天用粉塵螨變應(yīng)原粗浸液50μg+2mg Al(OH)

2、3致敏，第28天小鼠麻醉狀態(tài)下行舌下含服疫苗治療(疫苗在小鼠舌下停留2分鐘)分別給予：PBS，高劑量粉塵螨疫苗(1mg)和低劑量粉塵螨疫苗(100 μ g)，每次間隔一天，共18次。完成免疫后1周，用50μg Der f1變應(yīng)原滴鼻激發(fā)，每天一次，連續(xù)7次。末次激發(fā)后一天，進(jìn)行氣道高反應(yīng)性的檢測(cè)，四組小鼠均分別先用PBS測(cè)基礎(chǔ)Penh值，然后依次以1mg/ml、10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml、100mg/ml乙酰甲膽堿激

3、發(fā)，觀(guān)察Penh值的變化。 2、末次激發(fā)后二天，各組小鼠麻醉后，用冷磷酸鹽緩沖液(PBS)500μl進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(BAL)，反復(fù)抽吸3次，然后回收支氣管肺泡灌洗液(BALF)，并記錄回收量，用劉氏染色液染色，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)。 3、末次激發(fā)后第三天各組小鼠在麻醉后取頜下淋巴結(jié)和肺組織，采用免疫組織化學(xué)雙染色法對(duì)頜下淋巴結(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞和肺組織內(nèi)的NF—κ B染色定位，在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察并用體視學(xué)測(cè)量它

4、們的體密度、數(shù)密度以及表面積密度。 結(jié)果： 1、哮喘模型組小鼠激發(fā)后可見(jiàn)咳嗽、喘息、呼吸加深加快，煩躁不安。高劑量治療組激發(fā)后也可見(jiàn)類(lèi)似癥狀和體征，但表現(xiàn)明顯減輕。 2、正常組小鼠頜下淋巴結(jié)內(nèi)的33D1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)密度(2.03±0.52)×10-3μm-3、體積密度(2.75±1.33)×10-3μm0、表面積密度(2.32±1.20)×10-3μm-1；哮喘模型組數(shù)密度(14.88±3.04)×10-3μm-3

5、、體積密度(23.99±5.09)×10-3μm0、表面積密度(22.06±1.67)×10-3μm-1；高劑量治療組數(shù)密度(2.52±0.90)×10-3μm-3、體積密度(4.32±1.34)×10-3μm0、表面積密度(3.17±0.85)×10-3μm-1；高劑量治療組各參數(shù)與模型組比較(P＜0.01)有顯著差異，模型組與正常組比(P＜0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、正常組小鼠肺組織NF—κB陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)密度(3.02±0.

6、26)×10-3μm-3、體積密度(4.88±1.02)×10μm0、表面積密度(3.86±0.95)10-3μm-1；哮喘模型組數(shù)密度(70.46±2.37)×10-3μm-3、體積密度(88.26±1.73)×10-3μm0、表面積密度(86.03±1.48)10-3μm-1；高劑量治療組數(shù)密度(10.68±1.39)×10-3μm-3、體積密度(14.30±1.09)×10-3μm0、表面積密度(14.02±0.51)10-3μm

7、-1；高劑量治療組各參數(shù)與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)，模型組與正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；低劑量治療組與模型組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4、哮喘模型組小鼠肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)(79.05±11.58)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)(17.63±4.98)；高劑量治療組細(xì)胞總數(shù)(37.99±5.27)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)(3.80±0.67)；低劑量治療組細(xì)胞總數(shù)(63.06±11.66)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)(17.43

8、±2.87)。哮喘小鼠在高劑量疫苗治療后肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞都有所下降，高劑量治療組與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)，低劑量治療組與模型組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 5、高劑量治療組小鼠比模型組氣道高反應(yīng)性降低，而低劑量治療組與模型組比較差異不大。 結(jié)論： 1、舌下含服粉塵螨疫苗治療哮喘小鼠有效，累積劑量為900 μg Der f1/18mg總蛋白的舌下含服粉塵螨疫苗對(duì)小鼠過(guò)敏性哮喘具