肝素酶siRNA對肝癌細(xì)胞生長抑制作用的研究及抗人肝素酶單克隆抗體的制備.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文肝素酶siRNA對肝癌細(xì)胞生長抑制作用的研究及抗人肝素酶單克隆抗體的制備姓名：劉至玄申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生化與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：宮鋒20070510玨蠹醒!i型△墅旺堡塑塑生籃翅型拄廈斂塹塞厘菹厶趕耋睦皇立隆菹住曲劁圣中文摘要肝素酶siRNA對肝癌細(xì)胞生長抑制作用的研究及抗人肝素酶單克隆抗體的制備肝素酶(Heparanase，HPA)是一種B一葡萄糖苷內(nèi)切酶，特異性降解細(xì)胞外基質(zhì)和血管基底膜

2、中硫酸肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycans。HSPGs)的降解，破壞組織和血管的完整性，釋放結(jié)合于硫酸肝素上的bFGF、VEGF等生物活性分子，與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，近年來成為腫瘤診斷和治療的重要研究對象。本實(shí)驗(yàn)采用RNA干擾(RNAi)技術(shù)研究肝素酶與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系。通過肝素酶siRNA抑制肝癌細(xì)胞HepG2中肝素酶的表達(dá)，得到了肝素酶低表達(dá)的HepG2細(xì)胞株。采用流式細(xì)胞術(shù)、westernblot

3、、RTPCR，免疫組化等方法對細(xì)胞鑒定的結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組肝癌細(xì)胞肝素酶基因和蛋白表達(dá)明顯降低；將實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞接種裸鼠皮下所獲得的成腫瘤數(shù)據(jù)表明，實(shí)驗(yàn)組成瘤速度明顯減緩、瘤重下降；腫瘤組織的免疫組化結(jié)果顯示，對照組腫瘤組織肝素酶呈強(qiáng)陽性，實(shí)驗(yàn)組呈弱陽性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了肝素酶在腫瘤生長過程中的重要作用，提示RNAi技術(shù)對肝素酶表達(dá)及成瘤性具有抑制效果，說明RNA干擾技術(shù)用于臨床腫瘤的治療具有很大的潛力。采用抗原優(yōu)勢表位的預(yù)測、合成肝素