穴位敷貼治療小鼠過敏性鼻炎免疫機制的研究.pdf

1、過敏性鼻炎(allergicrhinitis)也稱變態(tài)反應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性鼻炎，是一種吸入變應(yīng)原而導(dǎo)致的以鼻黏膜嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞等多種炎性細胞浸潤，IgE介導(dǎo)的免疫細胞釋放化學(xué)介質(zhì)引起的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)炎癥性疾病，以鼻癢、打噴嚏、流清涕等為主要癥狀，可并發(fā)哮喘、蕁麻疹等。國外研究揭示過敏性鼻炎發(fā)生、發(fā)展與社會開放程度和經(jīng)濟發(fā)展水平密切相關(guān)；近幾年，我國經(jīng)濟發(fā)展很快，過敏性鼻炎的患病率也呈明顯上升趨勢，我國該病發(fā)病率在10％左

2、右，嚴重危害人民身心健康。 西醫(yī)治療過敏性鼻炎以免疫療法和藥物治療為主，均存在不足。免疫療法，變應(yīng)原較難確定而且標準難一致，起效慢，療程長，不宜堅持，難以治愈；藥物治療以抗組胺藥、縮血管藥、糖皮質(zhì)激素、抗膽堿能藥、肥大細胞穩(wěn)定劑等為主，雖然改善癥狀較快，但毒副作用大。 過敏性鼻炎屬于中醫(yī)學(xué)“鼻鼽”、“鼽嚏”的范疇。針灸穴位敷貼治療過敏性鼻炎具有悠久的歷史和良好的療效。雖然針灸穴位敷貼治療過敏性鼻炎取得較好療效，但對其免疫

3、機制的研究報道較少，處于臨床觀察或個別免疫指標檢測等較淺層次階段。本論文系統(tǒng)研究穴位敷貼治療小鼠過敏性鼻炎的免疫機制，為針灸穴位敷貼治療過敏性鼻炎提供科學(xué)的理論依據(jù)。 一、研究方法與內(nèi)容(一)文獻研究運用文獻研究方法，分別闡述現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、中醫(yī)學(xué)對過敏性鼻炎的臨床與實驗研究，并在此基礎(chǔ)上進行評述與展望。 (二)實驗研究本研究主要通過不同處理組別對過敏性鼻炎小鼠行為學(xué)、病理學(xué)、血液及肺泡灌洗液肥大細胞、嗜酸性粒細胞、IgE、淋

4、巴細胞特異性增殖及分泌淋巴細胞因子等多個環(huán)節(jié)的影響，研究穴位敷貼治療過敏性鼻炎的機理，從細胞、分子水平揭示穴位敷貼治療過敏性鼻炎的機制。 1、實驗動物與分組：雌性7周齡BALB/c小鼠60只，體重20～25克，清潔級，隨機分為正?？瞻捉M小鼠、卵白蛋白(OVA)過敏性鼻炎組小鼠、穴位敷貼治療組小鼠、地塞米松治療組小鼠、假治療組小鼠5組。 2、OVA過敏性鼻炎模型制備：采用OVA混懸液腹腔注射及滴鼻造模法。 3、穴位

5、敷貼藥物制備與用穴：依據(jù)中醫(yī)藥理論和導(dǎo)師學(xué)術(shù)思想配制藥物及選穴。 4、觀察不同處理組別OVA所致過敏性鼻炎小鼠模型行為學(xué)及病理組織學(xué)改變； 5、觀察不同處理組別OVA所致過敏性鼻炎小鼠模型血液及呼吸道局部的免疫反應(yīng)[血液及肺泡灌洗液(BALF)細胞分類、IgE檢測、Th1/Th2淋巴細胞及其分泌淋巴細胞因子、腹腔肥大細胞脫顆粒試驗]； 6、觀察不同處理組別OVA所致過敏性鼻炎小鼠模型外周血液單個核淋巴細胞分泌細胞

6、因子功能； 7、分析各相關(guān)指標的改變意義，闡明穴位敷貼治療過敏性鼻炎的免疫學(xué)機制。 二、研究結(jié)果(一)文獻研究1、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、中醫(yī)學(xué)研究均表明過敏性鼻炎與過敏性哮喘相互關(guān)聯(lián)。 2、西藥治療過敏性鼻炎普遍都有不同癥狀、不同程度的副作用，這是西藥治療本病存在的最嚴重問題。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫治療也存在起效慢，難以治愈的缺點。為此，迫切需要找尋基本無副作用且療效顯著的其他治療方法。中醫(yī)針灸是一條探索的道路。另一方面，盡管現(xiàn)代

7、醫(yī)學(xué)在過敏性鼻炎的治療上有不足之處，但現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對本病病理生理基礎(chǔ)的認識，實驗研究方法等為中醫(yī)治療過敏性鼻炎的研究提供了良好的理論基礎(chǔ)。中醫(yī)研究過敏性鼻炎需要向現(xiàn)代醫(yī)學(xué)學(xué)習(xí)和借鑒。 (二)實驗研究1、通過小鼠行為學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)OVA過敏性鼻炎組小鼠鼻噴嚏平均次數(shù)明顯多于正?？瞻捉M小鼠，二者有極顯著差異。表明使用的OVA過敏性鼻炎組小鼠模型較成功，小鼠出現(xiàn)顯著的過敏性鼻炎癥狀——噴嚏次數(shù)顯著增加；穴位敷貼組小鼠鼻噴嚏平均次數(shù)明顯少于O

8、VA過敏性鼻炎組小鼠。 2、通過觀察小鼠鼻黏膜組織病理學(xué)變化，結(jié)果正常空白組小鼠鼻黏膜大多是輕度的嗜酸性細胞、嗜中性細胞、淋巴細胞浸潤，而OVA過敏性鼻炎組小鼠鼻黏膜上述三種細胞浸潤都是中度以上，與正?？瞻捉M小鼠相比，OVA過敏性鼻炎組小鼠鼻黏膜嗜酸性細胞浸潤明顯較重，嗜中性細胞浸潤也明顯較重但不如嗜酸性細胞嚴重，淋巴細胞浸潤也明顯較重但也不如嗜酸性細胞嚴重。 3、通過小鼠腹腔肥大細胞脫顆粒試驗，顯示OVA過敏性鼻炎小鼠

9、的腹腔肥大細胞有明顯的脫顆?，F(xiàn)象，與正常小鼠腹腔肥大細胞脫顆粒率相比，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 4、通過觀察小鼠血液系統(tǒng)血細胞分類檢測，發(fā)現(xiàn)與正常空白組小鼠相比，OVA過敏性鼻炎組小鼠外周血嗜酸性粒細胞(EOS)百分含量及絕對值都明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 5、通過觀察小鼠血液系統(tǒng)血清IgE檢測，發(fā)現(xiàn)與正?？瞻讓φ战M小鼠相比，OVA過敏性鼻炎組與假治療組小鼠的血清sIgE含量顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與OVA過敏性鼻炎

10、組小鼠相比，穴位敷貼治療組與地塞米松治療組小鼠的血清OVAsIgE含量顯著降低，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義。 6、通過觀察小鼠脾淋巴細胞系統(tǒng)脾T淋巴細胞特異性增殖實驗，發(fā)現(xiàn)正?？瞻捉M小鼠脾淋巴細胞在體外受OVA刺激后沒有明顯增殖；OVA過敏性鼻炎組、假治療組小鼠脾淋巴細胞在體外受OVA刺激后顯著增殖，與正常空白組小鼠的相比差異極顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。OVA過敏性鼻炎組、假治療組二組小鼠脾淋巴細胞OVA特異性增殖指數(shù)沒有明顯差異。而穴位敷貼

11、治療組、地塞米松治療組小鼠脾淋巴細胞在體外受OVA刺激后增殖又不明顯，與OVA過敏性鼻炎組小鼠的相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 7、通過觀察小鼠脾淋巴細胞系統(tǒng)分泌淋巴細胞因子功能檢測，顯示與正常對照組小鼠相比，OVA過敏性鼻炎組小鼠血清Th1淋巴細胞因子(IFN-γ、IL-2)降低，Th2淋巴細胞因子(IL-4、IL-10)升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，同時還發(fā)現(xiàn)IFN-γ、IL-4的變化要大于IL-2、IL-10的變化；與OVA過敏性鼻炎

12、組小鼠血清相比，穴位敷貼組、地塞米松治療組小鼠血清Th1/Th2淋巴細胞因子的上述變化得到糾正，與OVA過敏性鼻炎組小鼠血清相比，Th1顯著增高、Th2淋巴細胞因子顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；假治療組與OVA過敏性鼻炎組小鼠血清Th1/Th2淋巴細胞因子濃度相比，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 8、通過BALF細胞學(xué)檢查與BALF淋巴細胞因子的檢測，發(fā)現(xiàn)OVA過敏性鼻炎組小鼠BALF中細胞總數(shù)、巨噬細胞、淋巴細胞、嗜酸性淋巴細胞和中性粒

13、細胞的數(shù)量較正常組分別升高，其中以嗜酸性淋巴細胞的增加最為明顯。與OVA過敏性鼻炎組相比，穴位敷貼組的上述各細胞成分分別減少，其中對嗜酸性淋巴細胞的抑制作用最明顯；地塞米松治療組的上述各細胞成分分別減少。穴位敷貼組與地塞米松治療組相比，各細胞成分無明顯差別。研究還發(fā)現(xiàn)，OVA過敏性鼻炎組小鼠BALF炎癥細胞滲出明顯，尤其是嗜酸性淋巴細胞。穴位敷貼、激素能減輕OVA引起的BALF炎癥細胞滲出，也是以抑制嗜酸性淋巴細胞最為顯著，而假治療不能

14、抑制OVA引起的BALF炎癥細胞滲出。 與相應(yīng)的脾淋巴細胞分泌的淋巴細胞因子相比，BALF的淋巴細胞因子濃度要低；IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10在BALF的濃度與在血清的濃度比較，IFN-γ、IL-2變化較明顯，其他差別不大。 三、研究結(jié)論：從以上研究結(jié)果可以得到以下結(jié)論：1、過敏性鼻炎和過敏性哮喘在實驗研究及臨床治療等某些方面有相似之處。 2、穴位敷貼治療能顯著減少OVA過敏性鼻炎噴嚏次數(shù)。

15、 3、小鼠OVA過敏性鼻炎模型鼻黏膜嗜酸性細胞浸潤最明顯，嗜酸性細胞浸潤在OVA過敏性鼻炎模型發(fā)病機制中起重要作用。 4、小鼠穴位敷貼、地塞米松治療能顯著降低肥大細胞脫顆粒，提示穴位敷貼、地塞米松治療通過抑制OVA過敏性鼻炎小鼠肥大細胞釋放組織胺、5-羥色胺、白三烯、緩激肽、嗜酸性細胞趨化因子等過敏介質(zhì)，降低血管通透性、減少炎癥滲出等，發(fā)揮抗過敏作用?？梢酝茰y穴位敷貼抗過敏機制為穩(wěn)定肥大細胞膜，抑制肥大細胞脫顆粒，減弱致炎介質(zhì)產(chǎn)

16、生。 5、在OVA引起的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)中，以EOS為主的炎癥細胞介導(dǎo)的呼吸道免疫病理炎癥反應(yīng)在OVA過敏性鼻炎模型中起著重要作用。穴位敷貼、地塞米松治療通過抑制OVA過敏性鼻炎組小鼠外周血EOS產(chǎn)生而對過敏性鼻炎起到治療作用。 6、OVA過敏性鼻炎組、假治療組小鼠脾淋巴細胞在體內(nèi)已經(jīng)接受了OVA抗原信息，體外再受OVA刺激后，OVA特異性淋巴細胞克隆顯著活化，表現(xiàn)為顯著增殖；假治療不能抑制OVA特異性增殖免疫反應(yīng)。穴位敷貼

17、、地塞米松通過抑制小鼠免疫細胞，使之對OVA體外刺激不再發(fā)生活化，反映為增殖不明顯。表明穴位敷貼、地塞米松通過抑制小鼠免疫反應(yīng)達到治療過敏性鼻炎目的。 7、OVA刺激小鼠免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了特異性體液免疫反應(yīng)——特異性IgE(sIgE)，提示OVA過敏性鼻炎是一種IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，顯示了IgE在OVA過敏性鼻炎發(fā)病機制中的作用。提示穴位敷貼、地塞米松治療通過降低小鼠體內(nèi)sIgE達到治療過敏性鼻炎目的。 8、OVA小鼠哮