不同劑量的紫蘇油對(duì)大鼠血清膽固醇水平的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、當(dāng)前心血管疾病已成為我國(guó)成年人死亡的主要原因之一，而血脂異常特別是高膽固醇血癥是導(dǎo)致心血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素之一。因此，預(yù)防和控制血脂異常特別是高膽固醇血癥的發(fā)生發(fā)展對(duì)降低心血管疾病的發(fā)病率和改善其預(yù)后有著極為重要的意義。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明紫蘇油可以降低大鼠血中膽固醇水平，但其機(jī)制尚不清楚。肝臟在調(diào)節(jié)機(jī)體膽固醇的平衡中發(fā)揮著中心作用。首先，體內(nèi)膽固醇70％～80％由肝臟合成，3-羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydr

2、oxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase，HMG-CoA R)是膽固醇合成的限速酶；其次，在肝中轉(zhuǎn)化為膽汁酸是膽固醇在體內(nèi)代謝的主要去路，而膽固醇7a-羥化酶(cholesterol 7a-hydroxylase，CYP7A1)是調(diào)節(jié)膽汁酸合成的限速酶，所以這兩個(gè)酶在維持機(jī)體膽固醇的內(nèi)穩(wěn)態(tài)中起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)用不同劑量的紫蘇油替代高脂飼料中的豬油對(duì)Wistar大鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察了其對(duì)大鼠血清膽

3、固醇水平和HMG-CoA R及CYP7A1 mRNA表達(dá)的影響，旨在闡明紫蘇油對(duì)大鼠血清膽固醇水平的影響及其分子機(jī)制。 材料與方法： 1、動(dòng)物的分組 45只雄性Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，按體重隨機(jī)分為5組：基礎(chǔ)對(duì)照組(基礎(chǔ)組)，豬油對(duì)照組(豬油組)，紫蘇油低劑量組(紫蘇油I組)，紫蘇油中劑量組(紫蘇油Ⅱ組)，紫蘇油高劑量組(紫蘇油Ⅲ組)?；A(chǔ)組喂飼基礎(chǔ)飼料，豬油組喂飼豬油高脂飼料，其構(gòu)成為：83.75％的

4、基礎(chǔ)飼料，15％豬油，1％膽固醇和 0.25％的膽鹽；各紫蘇油干預(yù)組的飼料分別用6％、10％和15％的紫蘇油替代豬油高脂飼料中相同比例的豬油配制而成，干預(yù)時(shí)間為8w。 2、樣品采集 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)大鼠禁食12h后稱重，用乙醚麻醉，由腹主動(dòng)脈采血，分離血清。分離肝臟，分離雙側(cè)。腎臟周圍、雙側(cè)附睪周圍和腸系膜脂肪墊，分別稱重。 3、指標(biāo)分析 (1)血脂的測(cè)定：按試劑盒說明，在ECOM-F6124半自動(dòng)

5、生化分析儀上測(cè)定血清中總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(10w-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)。 (2)計(jì)算肝指數(shù)和內(nèi)臟脂肪／體重比值：①肝指數(shù)(％)=肝重(g)／體重(g)X 100；②腎周脂

6、肪／體重(％)=雙側(cè)腎臟周圍脂肪重(g)／體重(g)×100；③睪周脂肪／體重(％)=雙側(cè)附睪周圍脂肪重(g)／體重(g)×100；④腸系膜脂肪／體重(％)=腸系膜脂肪墊重(g)／體重(g)×100；⑤內(nèi)臟脂肪／體重(％)=[雙側(cè)腎臟周圍脂肪重(g)+雙側(cè)附睪周圍脂肪重(g)+腸系膜脂肪墊重(g)]／體重(g)×100。 (3)檢測(cè)各組大鼠肝臟病理改變：觀察各組大鼠肝臟色澤，取部分肝組織放入10％中性甲醛中固定，常規(guī)石蠟包埋，切

7、片，進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察大鼠肝組織病理學(xué)改變。 (4)肝臟中mRNA表達(dá)量的測(cè)定：用RNAout試劑提取30～50mg肝組織中總RNA。取總RNAl μl，按Takara RNA PCR試劑盒說明，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。測(cè)試指標(biāo)為HMG-CoA R和CYP7A1，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde 3-phosphte dehydrogenase，GAPDH)作為對(duì)照。各指標(biāo)反應(yīng)條件相同，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為

8、：30℃ 10min，42℃ 30min，99℃ 5min，5℃ 5min。擴(kuò)增反應(yīng)條件為：94℃ 2min；94℃ 30sec，54℃ 30sec，72℃ 30sec，31個(gè)循環(huán)；再在72℃延伸10min。取預(yù)染液染色的擴(kuò)增產(chǎn)物7μl，在genefinder染色的2％瓊脂糖凝膠中電泳后，于凝膠成像分析儀下拍照，以各目標(biāo)產(chǎn)物與GAPDH產(chǎn)物的灰度值X面積的比值表示該指標(biāo)的相對(duì)表達(dá)量。 4、統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用X+S表示，

9、用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為p<0.05。 結(jié)果： 1、動(dòng)物一般狀況及體重變化 實(shí)驗(yàn)期間，除紫蘇油Ⅲ組有一只大鼠死亡外，其余各組大鼠生長(zhǎng)發(fā)育未見異常表現(xiàn)。各組大鼠體重增量，以豬油組最多，紫蘇油Ⅲ組最少，但各組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。各組大鼠攝食量以紫蘇油Ⅲ組最低，與其他各組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。各組飼料效價(jià)也以紫蘇油Ⅲ組最低，但組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

10、>0.05)。 2、各組大鼠血脂水平 比較各組大鼠TC、TG水平，均以豬油組最高，其中TC水平的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，TG水平上，豬油組與紫蘇油Ⅱ組和紫蘇油Ⅲ組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；LDL-C水平也顯示出豬油組高于其他各組的趨勢(shì)；比較各組HDL-C水平，各紫蘇油組均低于基礎(chǔ)組(p<0.05)，紫蘇油Ⅱ組和紫蘇油Ⅲ組還低于豬油組(p<0.05)。 3、各組大鼠肝指數(shù)和內(nèi)臟脂肪／體重比

11、值 與基礎(chǔ)組比較，其他各組大鼠肝指數(shù)均有升高(p<0.01)，紫蘇油Ⅲ組大鼠肝指數(shù)還高于豬油組大鼠肝指數(shù)(p<0.01)。紫蘇油Ⅱ組腸系膜脂肪／體重高于其他各組(p<0.05)；紫蘇油II組腎周脂肪／體重、睪周脂肪／體重和內(nèi)臟脂肪／體重在絕對(duì)值上也高于其他各組，但其間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 4、各組大鼠肝臟病理改變 觀察各組大鼠肝臟大體標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)組大鼠肝臟顏色鮮紅，而其它各組大鼠的肝臟呈土黃色，切

12、面呈油膩感。由各組大鼠肝臟HE切片可見，基礎(chǔ)組大鼠肝細(xì)胞沒有脂肪變性，而其他各組大鼠均有少量的肝細(xì)胞發(fā)生了脂肪變性。 5、各組大鼠肝臟中HMG-CoA R和CYP7A1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量 各組大鼠之間，HMG-CoA R tuRNA和CYPTA1 mRNA表達(dá)量的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 結(jié)論： 1、不同劑量的紫蘇油均可降低大鼠血清TC水平，但并未呈現(xiàn)出劑量反應(yīng)關(guān)系，綜合其他指標(biāo)觀察，以低