CD163+腫瘤相關(guān)性巨噬細胞在惡性胸腔積液鑒定與治療中的意義.pdf

1、惡性胸腔積液是許多腫瘤的一種常見的晚期臨床癥狀，包括肺癌和乳腺癌等。利用細胞學(xué)檢測法來鑒定胸腔積液是良惡性存在敏感性較低、主觀性較強的弊端，容易造成漏診或誤診，另外化療藥灌注伴隨有嚴重的毒副作用，因此需要尋找新的更敏感可靠的檢測指標是非常重要的。一些研究已經(jīng)證實了巨噬細胞在惡性胸腔積液腫瘤微環(huán)境中作為一種調(diào)節(jié)性細胞發(fā)揮著重要的作用。我們猜測腫瘤相關(guān)性巨噬細胞可以作為鑒定惡性胸腔積液較為敏感的生物學(xué)標志與治療的靶點。本實驗中我們選取50例

2、惡性胸腔積液患者以及50例非惡性胸腔積液患者的胸腔積液與外周血，其中惡性胸腔積液均經(jīng)細胞學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)有腫瘤細胞。采用流式細胞儀檢測了巨噬細胞亞型，再利用qRT-PCR技術(shù)分析了惡性與非惡性胸腔積液患者的CD14+單核/巨噬細胞相關(guān)基因的表達水平。然后采用雙盲實驗進行進一步驗證;采用統(tǒng)計學(xué)方法Student'st-test、秩和檢驗以及ROC進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在所有胸腔積液中均表達CD14+巨噬細胞，并且在惡性胸腔積液中高表達，與非惡性胸腔

3、積液比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。在惡性胸腔積液中高表達抑炎性細胞因子，在非惡性胸腔積液中高表達促炎性細胞因子(p＜0.05)。提示惡性胸腔積液是一種免疫抑制性微環(huán)境。更重要是CD163+CD14+細胞在惡性胸腔積液中特異性高表達，與炎性胸腔積液相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。但是在外周血中幾乎不表達。當選取3.65％作為Cutoff值時，CD163+CD14+做為鑒定肺癌患者惡性胸腔積液的特異性為100％,敏感度為86％，在40例雙

4、盲實驗中，特異性為100％，敏感度為78.9％，共140例胸腔積液的檢測結(jié)果顯示CD163+CD14+巨噬細胞在惡性胸腔積液中特異性高表達，進一步驗證CD163+CD14+巨噬細胞可以作為惡性胸腔積液的特異性標志。并且發(fā)現(xiàn)CD163+CD14+巨噬細胞(M2型TAM)，主要分泌抑炎性細胞因子，因此促進M2型向M1型巨噬細胞轉(zhuǎn)化可以作為治療惡性胸腔積液的新戰(zhàn)略。銅綠假單胞菌已經(jīng)被證實通過活化固有免疫細胞包括巨噬細胞、DC細胞進而激活免疫系

5、統(tǒng)，本實驗中通過CD14磁珠分離來自惡性胸腔積液患者的單核細胞，體外加入銅綠假單胞菌藥物處理6h，利用qRT-PCR技術(shù)分析惡性胸腔積液中TAM相關(guān)基因在加藥處理后基因水平的變化。結(jié)果顯示抑炎性細胞因子如Arginase-Ⅰ、TGF-β下調(diào)，促炎性細胞因子如iNOS，TNF-α上調(diào)，另外藥物作用會誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)性巨噬細胞高表達TLR4?？傊?，銅綠假單胞菌可以通過上調(diào)TLR4進而逆轉(zhuǎn)腫瘤相關(guān)性巨噬細胞的表型與功能，因此我們提出初步的理論，認