建立一種對(duì)21-18-13-X-Y染色體數(shù)目異常進(jìn)行聯(lián)合診斷的多重定量PCR體系.pdf

1、目的：利用定量 PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)多對(duì)引物，建立一種可以對(duì)21、18、13、X、Y五對(duì)染色體非整倍體異常進(jìn)行聯(lián)合診斷的多重定量熒光PCR體系。
　　方法：選取21號(hào)染色體上位點(diǎn) D21S2052、D21S1441、D21S1446、LFG21、D21S1435、D21S11、D21S1246、PentaD，共8對(duì)；18號(hào)染色體位點(diǎn) D18S51、D18S535、D18S1002、D18S877、D18S851、D18S391，共6對(duì)

2、；13號(hào)染色體位點(diǎn)D13S256、D13S797、D13S317、D13S305、D13S800、D13S325，共6對(duì)；性別位點(diǎn)共7對(duì)，包括X染色體位點(diǎn)DXS9895、DXS6805、XHPRT3對(duì)，Y染色體位點(diǎn)SRY1對(duì)，XY共有位點(diǎn)AMEL、ZFXY2對(duì)，X和3號(hào)常染色體共有位點(diǎn)TAF9L1對(duì)，共27對(duì)位點(diǎn)進(jìn)行熒光定量 PCR。并對(duì)500例正常樣本，160例已知核型分析的陽性樣本和40例臨床診斷為高危的羊水樣本進(jìn)行研究，并抽取40

3、例正常樣本和全部高危羊水樣本同時(shí)進(jìn)行染色體核型分析的對(duì)照試驗(yàn)來驗(yàn)證體系的準(zhǔn)確度和可靠性。
　　結(jié)果：1 QF-PCR結(jié)果：檢測(cè)報(bào)告在24～48小時(shí)內(nèi)得出，共檢測(cè)700例，分析成功681例（檢出率97.28％）。其中500例正常樣本檢出485例，包括男性258例，女性227例，抽取40正常樣本同時(shí)進(jìn)行QF-PCR和核型分析，兩種檢測(cè)結(jié)果除2例核型分析結(jié)果失敗無法比對(duì)外，其余38例檢測(cè)結(jié)果完全一致（一致率100%），均為21、18、1

4、3、X、Y正常樣本；160例已知核型染色體異常樣本檢出159例，失敗1例，檢出結(jié)果與核型結(jié)果一致，包括79例21-三體綜合征，73例XXY綜合征，5例18-三體綜合征，1例13三體綜合征，1例XYY綜合征；40例高危樣本檢測(cè)成功37例，失敗3例，共檢出21、18、13、X、Y染色體數(shù)目正常27例，異常10例，即10例21三體綜合征，與核型分析結(jié)果一致。2核型分析結(jié)果：檢測(cè)報(bào)告約在2～3周得出；共進(jìn)行核型分析樣本80例，成功73例，成功率

5、91.25%，失敗7例，失敗率8.75%，其中核型正常63例，40例臨床檢測(cè)為高危的樣本細(xì)胞培養(yǎng)失敗5例，成功的樣本中染色體數(shù)目異常10例，且10例為21三體綜合征。3兩種結(jié)果比較：QF-PCR技術(shù)更快捷，成功率更高，兩種方法一致性100%，總體異常檢出率100%，總體檢測(cè)假陰性率0%，假陽性率為0%。
　　結(jié)論：研究表明，本研究中所選擇的染色體位點(diǎn)在中國人群中具有較高的多態(tài)性，QF-PCR體系可以對(duì)染色體數(shù)目異常進(jìn)行簡便、快速、