乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合三氧對犬四氯化碳肝損傷的保護作用.pdf

1、深圳市科技局課題(200204176)目的和意義乙肝扶正排毒膠囊是治療慢性乙型病毒性肝炎的中藥復方制劑。三氧是由三個氧原子組成的(O<,3>)，具有強氧化性，有很強的免疫誘導和免疫殺傷作用。醫(yī)用三氧是三氧與純氧的混合氣體。本課題以大型動物犬作為研究對象，研究中藥乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合醫(yī)用三氧對四氯化碳(CCl<,4>)致犬急性肝損傷的影響，用實驗醫(yī)學的方法揭示了兩者聯(lián)合應(yīng)用對肝臟的保護作用，從藥效學的角度為乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合醫(yī)用三氧的臨

2、床應(yīng)用提供了可靠的依據(jù)。 方法 1藥物與儀器乙肝扶正排毒膠囊：根據(jù)楊運高教授經(jīng)驗方研制的中成藥非標制劑齊墩果酸片：廣東南國藥業(yè)有限公司生產(chǎn)醫(yī)用三氧發(fā)生器：德國生產(chǎn)，經(jīng)我國FDA注冊批準醫(yī)用. 2 模型一次性腹腔注射50.0％(W/W)CCl<,4>花生油溶液，0.9ml/kg體重，建立犬急性肝損傷模型。 3 分組和給藥 取家犬24只，隨機分為4組，每組6只，分為模型(Model)組、齊墩果酸(OAT

3、)組(齊墩果酸片，10mg/d·kg體重，口服)、乙肝扶正排毒膠囊(YC)組(乙肝扶正排毒膠囊，0.2g/d·kg體重，口服)、聯(lián)合用藥(YC+O<,3>)組(乙肝扶正排毒膠囊，0.2g/d·kg體重，口服；三氧與純氧混合氣體，三氧濃度20μg/ml，150ml/次·只，隔天一次，直腸吹注)。OAT組、YC組、YC+O<,3>組分別給藥30天(三氧給藥15次)。模型組及其它三組(末次給藥后第二天)，均一次性腹腔注射50.0％(W/W)C

4、Cl<,4>花生油溶液，0.9ml/kg體重，造成急性肝損傷模型。予普通飲食，食欲較差時予補液治療。 4 觀察、檢測指標4.1 全身情況的觀察觀察造模前后犬的全身情況，即精神、飲食、活動度、大小便等變化。 4.2 生存時間精確到小時(h)4．3血液生化指標的測定分別于造模前及造模后24h、2d、3d、4d、7d、14d采血，由南方醫(yī)院檢驗科測定肝功(ALT、AST/AST、TBIL)、凝血酶原時間(PT)、血氨(AMMO

5、)、腎功(BuN)。 4.4組織學檢查造模前肝組織活檢證實無病變。造模后，動物死亡時或存活15天時，采取肝臟組織，以10％甲醛溶液固定和石蠟包埋制成切片，HE和Gomori銀染色，光鏡下觀察。 5．統(tǒng)計方法 用統(tǒng)計軟件SPSS 12.0，生存分析用Kaplan Meier法，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示(X±s),組間及組內(nèi)數(shù)據(jù)比較均用Independent-Samples Tests檢驗。α=0.05為檢驗的顯著性水

6、準。 結(jié)果 1犬全身情況造模前，各組犬精神狀態(tài)良好，對外界反應(yīng)靈敏，毛色有光澤，飲食正常，大便成形，黃褐色，小便正常。造模后，各組犬均立即出現(xiàn)嘔吐及平衡力失調(diào)。除YC+O<,3>組以外，其它三組中部分犬在頭4d內(nèi)表現(xiàn)為懶動、喜獨處或煩躁、來回走動，部分犬表現(xiàn)不同程度的精神食欲較差、尿黃。YC+O<,3>組中除2只犬出現(xiàn)尿黃，其它犬全身情況與造模前后比較無明顯改變。 2 生存分析 分別用三種方法Log Ran

7、k、Breslow 和Tarone-Ware檢驗四組的生存率：三種檢驗方法YC+O<,3>組與模型組比較差異有顯著性意義(P<0.05)；其他各組兩兩比較差異均無顯著性意義(P>0.05)。結(jié)合四組的生存曲線，表明乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合醫(yī)用三氧預防性治療能顯著提高CCl<,4>急性肝損傷實驗犬的生存率。 3 血液生化指標對于除AST/ALT外的各項指標：造模前后，模型組各指標均表現(xiàn)為先升高后恢復的趨勢。(1)造模前：四組比較，各指

8、標組間差異均無顯著性意義(P>0.05)。(2)造模后：模型組分別與其他三組比較，AIT、TBIL、PT、AMMO值差異有顯著性意義(P<0.05)，模型組較其它三組高；YC組與YC+O<,3>組第4d的BUN值均較模型組高，差異有顯著性意義(P<0.05)。YC組與OAT 組比較，ALT值差異有顯著性意義(P<0.05)，YC組較OAT 組高；YC+O<,3>組與OAT 組比較，ALT、TBIL、PT、AMMO值差異有顯著性意義(P<

9、0.05)，OAT 組ALT、TBIL、PT值較YC+O<,3>組高，YC+O<,3>組AMMO值較OAT組高。 對于AST/ALT值，造模后24h模型組和YC組均小于1.0，之后又顯著升高(AST/AIT>1.5)，以模型組升高較為明顯，3.4d又降到0.5以下。5.14d模型組持續(xù)下降，至第14d降至0.1；而YC組在第4d以后又開始回升，至第14d又升至略大于1.0。OAT組造模后第24h AST/AIT值在1.5-2.0

10、之間，之后開始下降至0.5左右，第7d后又回升，至第14d升至1.0。YC+O<,3>組的AST/ALT 值維持在1.0以上。 4 肝臟組織學檢查正常肝組織鏡下可見肝細胞索結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見肝細胞變性、壞死等病理變化，網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)正常。 模型組鏡下可見(1)中央?yún)^(qū)亞大塊壞死、出血，假小葉形成，壞死區(qū)充滿脂肪小泡，假小葉周邊脂肪變性，壞死區(qū)炎細胞浸潤、網(wǎng)狀支架塌陷；(2)肝細胞橋狀壞死、出血，中央?yún)^(qū)膽小管增生、

11、膽栓形成、膽色素沉積，門管區(qū)膽汁淤積，壞死區(qū)網(wǎng)狀支架塌陷；(3)肝細胞水泡變性、點狀壞死；(4)門管區(qū)碎屑狀壞死，炎性細胞濺出，嗜酸性小體形成。 OAT組和YC組鏡下可見(1)肝細胞灶性壞死，壞死區(qū)網(wǎng)狀纖維塌陷；(2)門管區(qū)碎屑狀壞死，炎性細胞濺出；(3)大面積脂肪變性。YC+03組鏡下可見肝細胞點狀壞死，少量脂肪變性。 結(jié)論 實驗結(jié)果顯示，乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合醫(yī)用三氧對急性肝損傷模型犬的作用主要體現(xiàn)為幾個方面：

12、(1)降低模型犬黃疸、肝性腦病的發(fā)生率，促進模型犬精神狀態(tài)、飲食情況的恢復，改善生存質(zhì)量。(2)顯著延長模型犬的生存時間。(3)顯著降低模型犬的ALT、TBIL、PT及AMMO值，體現(xiàn)了其降酶、退黃以及促進肝功能恢復的作用，其降酶、退黃、促進凝血功能恢復的效果優(yōu)于齊墩果酸片；雖然乙肝扶正排毒膠囊組ALT值高于齊墩果酸組(P<0.05)，但是TBIL、PT及AMMO值差異均無顯著性意義(P>0.05)，所以只能說明齊墩果酸片降酶效果優(yōu)于乙

13、肝扶正排毒膠囊，不能說明其總療效的差異。AST/ALT值的比較結(jié)果顯示，乙肝扶正排毒膠囊和齊墩果酸片能減輕肝損傷的程度，促進急性肝炎的恢復；乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合醫(yī)用三氧能起到保護肝臟、顯著降低肝損傷的作用。(4)肝臟組織病理結(jié)果顯示，未用過任何藥物的模型組犬肝細胞壞死嚴重、壞死范圍大，即使生存時間比較長的犬，其肝臟壞死程度也較其它三組犬嚴重。單獨用乙肝扶工F排毒膠囊或齊墩果酸片的犬，其肝組織壞死范圍較模型組小。而用乙肝扶正排毒膠囊聯(lián)合醫(yī)