強(qiáng)迫癥GWAS及候選基因與早年創(chuàng)傷交互作用研究.pdf

1、目的:強(qiáng)迫癥是一種常見(jiàn)難治的非精神病性障礙,其發(fā)病原因復(fù)雜,目前普遍認(rèn)為是多基因的傳遞模式,即由多個(gè)微效基因協(xié)同并與環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致的疾病。強(qiáng)迫癥的全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)[包括單核苷酸多態(tài)(SNP)和CNV全基因組關(guān)聯(lián)]至今還未見(jiàn)報(bào)道,本研究對(duì)漢族早發(fā)性強(qiáng)迫癥進(jìn)行CNV和SNP的全基因組關(guān)聯(lián)研究并在較大樣本中進(jìn)行驗(yàn)證,探索拷貝數(shù)變異在強(qiáng)迫癥病因中的作用。同時(shí),強(qiáng)迫癥是一種異質(zhì)性障礙,本研究主要比較中國(guó)人群早發(fā)強(qiáng)迫癥與晚發(fā)強(qiáng)迫癥

2、的特征,進(jìn)一步比較早發(fā)性和晚發(fā)性強(qiáng)迫癥的差異及可能機(jī)制。同時(shí)評(píng)估早年創(chuàng)傷經(jīng)歷,探討遺傳變異與早年創(chuàng)傷交互作用在強(qiáng)迫癥發(fā)病中的作用。
　　方法:病例組來(lái)自2007-2011年在上海市精神衛(wèi)生中心心理咨詢門診就診的符合DSM-Ⅳ強(qiáng)迫癥診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者,共入組602例,其中男性339例,女性263例,506例來(lái)自廣告招募的健康對(duì)照。
　　采用Affymetrix Genome-Wide Human SNP Nsp/Sty6.0芯片(

3、包含906,600SNPs和945,826 CNV探針)對(duì)30例男性早發(fā)性強(qiáng)迫癥和30例年齡性別相匹配的健康對(duì)照DNA樣本進(jìn)行了全基因組基因分型。用Genotyping Console軟件從CEL,文件中得到CNState(DNA拷貝數(shù)),Affymetrix GeneChip SNP6.0.QC軟件進(jìn)行質(zhì)量控制,STRUCTLIRE version2.2軟件進(jìn)行人群分層分析?？ǚ綑z驗(yàn)比較不同拷貝數(shù)變異的頻率分布在病例和健康對(duì)照兩組中是

4、否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,用FDR方法多重檢驗(yàn)校正。
　　挑選芯片陽(yáng)性發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)區(qū)域,對(duì)照公共數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)其對(duì)應(yīng)基因的拷貝數(shù)變異在580例強(qiáng)迫癥和506例健康對(duì)照中進(jìn)行驗(yàn)證,主要采用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)兩區(qū)域的拷貝數(shù)缺失和擴(kuò)增進(jìn)行檢測(cè)。采用ETI-SF量表對(duì)其中的326例強(qiáng)迫癥和480例健康對(duì)照進(jìn)行早年創(chuàng)傷經(jīng)歷的評(píng)定。應(yīng)用Mann-Whitney非參數(shù)檢驗(yàn)和spearman相關(guān)分析兩個(gè)基因拷貝數(shù)變異、早年創(chuàng)傷與強(qiáng)迫癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。同時(shí),比較早

5、發(fā)性強(qiáng)迫癥和晚發(fā)性強(qiáng)迫癥在基因拷貝數(shù)變異和早年創(chuàng)傷經(jīng)歷的差別。最后多因素logistic分析強(qiáng)迫癥相關(guān)的病因機(jī)制,并應(yīng)用GMDR軟件進(jìn)行了基因和環(huán)境交互作用在強(qiáng)迫癥發(fā)生中作用進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:1)全基因組關(guān)聯(lián)芯片研究:病例和對(duì)照組年齡無(wú)差異(p=0.09),且均不存在人群分層現(xiàn)象(λ=1.0056)。通過(guò)應(yīng)用Affymetrix GeneChip SNP6.0.QC軟件進(jìn)行質(zhì)量篩查后,1809088個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)入統(tǒng)計(jì)分析,其

6、中常染色體位點(diǎn)1716863個(gè),X染色體位點(diǎn)84080個(gè),將在所有樣本中的常染色體CNState=2的位點(diǎn)過(guò)濾,過(guò)濾后的位點(diǎn)一共是70245個(gè),其中在病例組和對(duì)照組有顯著差異(p＜0.00011的基因拷貝數(shù)變異位點(diǎn)共81個(gè),合并相鄰區(qū)域后,7個(gè)區(qū)域在患者和對(duì)照中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中最明顯的兩個(gè)區(qū)域?yàn)?p31.1和20p13。1p31.1區(qū)域上相關(guān)的基因是編碼神經(jīng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子的NERG1,10/30例患者出現(xiàn)了該區(qū)域拷貝數(shù)的擴(kuò)增,健康對(duì)照

7、中則未發(fā)現(xiàn)。20p13區(qū)域上相關(guān)的基因是編碼信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白的SIRPB1,有13/30病例出現(xiàn)了該區(qū)域拷貝數(shù)的缺失,而健康對(duì)照中未發(fā)現(xiàn)。
　　2)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn):定量PCR對(duì)兩區(qū)域的拷貝數(shù)缺失和擴(kuò)增在580例強(qiáng)迫癥和506例健康對(duì)照中進(jìn)行了檢測(cè),證實(shí)了芯片研究的結(jié)論,其中1p31.1區(qū)域的NEGR1基因在病例組存在較多的拷貝數(shù)擴(kuò)增(t=7.03,p＜0.001);20p13區(qū)的SIRPB1基因在強(qiáng)迫癥患者中出現(xiàn)較多的拷貝數(shù)缺失(t=-12

8、.85,p＜0.001),且與晚發(fā)組相比,早發(fā)性強(qiáng)迫癥出現(xiàn)拷貝數(shù)缺失更顯著,兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(平均差值為0.67(SD=0.28),p=0.017)。
　　3)相對(duì)于對(duì)照組,強(qiáng)迫癥患者早年創(chuàng)傷量表總分更高(3.21±3.28 vs.3.90±3.27,p＜0.001),而且四個(gè)維度得分也均高于對(duì)照組,男女性別經(jīng)歷的創(chuàng)傷種類及數(shù)量上無(wú)明顯差異,但是女性強(qiáng)迫癥患者性創(chuàng)傷多于女性患者(0.33±0.69vs.0.16±0.45,

9、p=0.049)。與晚發(fā)組相比,早發(fā)性強(qiáng)迫癥經(jīng)歷更多的早年創(chuàng)傷(除了性創(chuàng)傷外),兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p值均小于0.01)。
　　4)NEGR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增和SIRPB1基因拷貝數(shù)缺失與Y-BOCS評(píng)分存在顯著的正相關(guān),早年創(chuàng)傷總分及各維度分值(除外性創(chuàng)傷)與強(qiáng)迫癥患者的起病年齡成負(fù)相關(guān)(p≤0.001)。Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)性別,NEGR1基因,SIRPB1基因,及情感創(chuàng)傷在強(qiáng)迫癥發(fā)病中起到重要作用。
　　5

10、)通過(guò)GMDR軟件對(duì)基因.環(huán)境交互作用的研究,發(fā)現(xiàn)最優(yōu)模型為情感創(chuàng)傷*SIRPBl*NEGR.1構(gòu)建的交互模型,因?yàn)槠浣徊鏅z驗(yàn)一致性高(10/10),檢驗(yàn)樣本準(zhǔn)確度較高(0.75),該交互作用的危險(xiǎn)度OR值為11.08(95％CI=2.34,52.54),兩組間卡方檢驗(yàn)也是有顯著差異(X2=9.79,p=0.002)。
　　結(jié)論:1p1.1和20p13區(qū)域的拷貝數(shù)擴(kuò)增和缺失與強(qiáng)迫癥發(fā)病相關(guān),這兩個(gè)區(qū)域中的NEGR1和SIRPB1在