P-糖蛋白抑制劑粉防己堿聯(lián)合還原性谷胱甘肽對(duì)帕金森病大鼠腦內(nèi)多巴胺能系統(tǒng)的影響研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分P-糖蛋白抑制劑粉防己堿聯(lián)合還原性谷胱甘肽對(duì)帕金森病大鼠生物學(xué)行為和紋狀體多巴胺及代謝物、相關(guān)酶的影響 目的:建立帕金森病大鼠動(dòng)物模型,觀察粉防己堿聯(lián)合還原型谷胱甘肽對(duì)其生物學(xué)行為和紋狀體多巴胺及代謝產(chǎn)物、相關(guān)酶的影響。 方法:應(yīng)用定向注射6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)制作大鼠模型,術(shù)后4周以阿樸嗎啡(apomorphine,APO)誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為檢測(cè)模型成功率,并將成功模型隨

2、機(jī)分組如下:未治療組(生理鹽水10 mg·kg-1·d-1),谷胱甘肽(Glutathione,GSH)治療組(GSH300mg·kg-1·d-1),左旋多巴(levodopa,L-dopa)治療組(L-dopa25mg·kg-1·d-1),GSH+L-dopa+粉防己堿(Tetrandrine,Tet)治療組(GSH 300mg·kg-1·d-1,L-dopa 25mg·kg-1.·d-1,Tet 15 mg·kg-1·d-1),GS

3、H+Tet治療組(GSH 300mg·kg-1·d-1,Tet15mg·kg-1·d-1),另加上正常對(duì)照組(生理鹽水10mg·kg-1·d-1),每組14只,腹腔注射上述藥物50天后觀察各組大鼠行為學(xué)變化及用高效液相色譜-電化學(xué)儀(HPLC-ECD)測(cè)定DA、HVA和DA代謝率(HVA/DA),并測(cè)定單胺氧化酶B(MAO-B)的活性。 結(jié)果:(1)術(shù)后4周APO誘發(fā)旋轉(zhuǎn)的模型成功率為73.6%。給藥50天后,未治療組,正常組及

4、GSH治療組的旋轉(zhuǎn)次數(shù)與給藥前相比未見明顯變化,L-dopa治療組(P<0.05),GSH+Tet治療組(P<0.01),GSH+L-dopa+Tet治療組(P<0.01)的旋轉(zhuǎn)次數(shù)比給藥前明顯減少,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;尤其是GSH+Tet治療組和GSH+L-dopa+Tet治療組注射APO后開始出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)時(shí)間延長,并有旋轉(zhuǎn)方向不定現(xiàn)象,后者還有個(gè)別大鼠有不轉(zhuǎn)現(xiàn)象。(2)GSH組、GSH+Tet組、GSH+Tet+L-dopa組及L-dopa

5、組的DA、HVA含量明顯高于未治療組,且GSH+Tet與GSH組及GSH+Tet+L-dopa與L-dopa組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);GSH+Tet組的MAO-B活性低于除正常對(duì)照組以外的其他各組,與GSH組和L-dopa組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);GSH+Tet組的HVA/DA在各組中最低。第二部分P-糖蛋白抑制劑粉防己堿聯(lián)合還原性谷胱甘肽對(duì)帕金森大鼠黑質(zhì)線粒體復(fù)合體重活性及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響目的:觀察P-糖蛋白

6、抑制劑粉防己堿合用還原性谷胱甘肽對(duì)帕金森病大鼠黑質(zhì)線粒體復(fù)合體I活性及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響。 方法:以上各組藥物干預(yù)50天后,每組隨機(jī)取6只腹腔麻醉,然后迅速在冰浴中分離出患側(cè)黑質(zhì)和紋狀體,制備勻漿,離心取上清液,參照文獻(xiàn)檢測(cè)各組黑質(zhì)線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體I(Complex I)活性及試劑盒測(cè)定黑質(zhì)GSH、紋狀體活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量。 結(jié)果:(1)GSH+Tet組的GSH、Complex I活性明顯高于除

7、正常組外的其他各組;GSH+Tet組兩者明顯高于GSH組(P<0.05),GSH+Tet+L-dopa組的GSH含量、Complex I活性明顯高于L-dopa治療組(P<0.05);(2)GSH+Tet治療組的ROS、MDA明顯低于除正常組外的其他各組,且GSH+Tet組明顯低于GSH組(P<0.05),GSH+Tet+L-dopa組的ROS、MDA明顯低于L-dopa治療組(P<0.05)。 第三部分P-糖蛋白抑制劑粉防己堿

8、合用還原性谷胱甘肽對(duì)帕金森病大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元凋亡的電鏡觀察目的:觀察P-糖蛋白抑制劑粉防己堿合用還原性谷胱甘肽對(duì)帕金森病大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元凋亡的影響。 方法:以上各組干預(yù)50天后每組隨機(jī)取2只腹腔麻醉,經(jīng)左心室灌注固定后斷頭取腦,行中腦冠狀位冰凍切片,進(jìn)行染色,漂洗,后固定,脫水包埋,超薄切片后電鏡觀察。 結(jié)果:(1)L-dopa治療后DA能神經(jīng)元可見中、晚期凋亡的形態(tài)學(xué)變化;(2)GSH治療組、GSH+Tet

9、治療組及GSH+L-dopa+Tet治療組可見早、中期凋亡的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;且GSH+Tet治療組和GSH+L-dopa+Tet治療組早期形態(tài)學(xué)改變更明顯。 結(jié)論: 1.采用SNC、VTA兩點(diǎn)定向注射6-OHDA法制作單側(cè)帕金森(PD)病大鼠模型方法可靠,成功率較高;GSH+Tet、GSH+L-dopa+Tet及L-dopa三種干預(yù)治療方法都能改善PD大鼠的生物學(xué)行為及增加紋狀體DA、HVA含量,以G

10、SH+L-dopa+Tet治療組最顯著;且發(fā)現(xiàn)6-OHDA誘導(dǎo)PD大鼠經(jīng)治療后旋轉(zhuǎn)次數(shù)與紋狀體DA含量呈良好相關(guān)性。 2.GSH、GSH+Tet及GSH+L-dopa+Tet治療組都能顯著增強(qiáng)PD大鼠黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能神經(jīng)元抗氧化能力,保護(hù)黑質(zhì)線粒體呼吸鏈復(fù)合體I,以GSH+Tet治療組最顯著。 3.GSH合用Tet要比單用GSH更能延緩帕金森大鼠腦內(nèi)黑質(zhì)DA能神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,L-dopa有加速DA能神經(jīng)細(xì)胞凋亡的趨向

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