牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體體外培養(yǎng)模型建立及其應(yīng)用.pdf

1、牙本質(zhì)是構(gòu)成牙齒硬組織的主體，而牙髓是牙齒組織中唯一的軟組織，由于牙本質(zhì)和牙髓在胚胎發(fā)育和功能上關(guān)系密切，將它們合稱為牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體。當(dāng)牙齒受到機(jī)械摩擦、細(xì)菌侵蝕等刺激時(shí)，牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體通過分泌基質(zhì)形成修復(fù)性牙本質(zhì)來維護(hù)牙齒硬組織結(jié)構(gòu)和保護(hù)牙髓組織。因此牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體及其生物學(xué)功能受到許多學(xué)者和口腔臨床醫(yī)師的關(guān)注。但由于研究的對象和方法有限，牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體損傷和修復(fù)的具體作用機(jī)制尚不清楚。本研究模擬了牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的體內(nèi)生存狀

2、態(tài)，在體外建立牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的器官培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行了相關(guān)生物學(xué)研究，探討了牙齒齲壞和損傷修復(fù)的機(jī)制。本研究分為兩個(gè)部分： 第一部分牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體體外模型培養(yǎng)。①牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體體外培養(yǎng)模型的建立取20-30歲成人新鮮、健康、完整的第三磨牙，縱向?qū)⒀例X切成厚約2mm的片狀結(jié)構(gòu)，每片牙片均包含有牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)和牙髓，采用DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行體外培養(yǎng)，隔天換液，連續(xù)培養(yǎng)21天。分別在第7天、14天和21天通過光鏡、電鏡和免疫組化

3、的方法對模型進(jìn)行檢測和鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)成牙本質(zhì)細(xì)胞和牙髓細(xì)胞在培養(yǎng)的第7天和14天時(shí)均保持有良好的細(xì)胞形態(tài)，DSPP染色陽性，但在21天時(shí)部分細(xì)胞開始發(fā)生變性。②牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體損傷的體外培養(yǎng)模型建立取20-30歲成人新鮮、健康、完整的第三磨牙，高速渦輪手機(jī)制備不同深度的窩洞，然后縱向?qū)⒀例X切成厚約2mm的片狀結(jié)構(gòu)，DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行體外培養(yǎng)，隔天換液，分別培養(yǎng)7天、14天、21天，并進(jìn)行組織學(xué)觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)窩洞制備至釉牙本質(zhì)界處時(shí)，牙髓

4、牙本質(zhì)復(fù)合體的培養(yǎng)時(shí)間及細(xì)胞形態(tài)與前一部分未經(jīng)備洞時(shí)相似；備洞至牙本質(zhì)1/2處時(shí)，可見成牙本質(zhì)細(xì)胞損傷及隨后形成新的替代細(xì)胞和基質(zhì)分泌；備洞至近髓室頂處時(shí)，僅可觀察到成牙本質(zhì)細(xì)胞死亡和基質(zhì)降解。 第二部分基質(zhì)金屬蛋白酶在齲壞和牙髓組織損傷和修復(fù)中的作用機(jī)制研究。⑴基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2在齲病發(fā)展過程中的表達(dá)研究以健康、淺齲和深齲牙齒中牙髓組織為研究對象，利用免疫組化、RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡檢測MM

5、P-2在其中的表達(dá)差異。采用單因素方差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP-2在健康牙齒中僅表達(dá)于成牙本質(zhì)細(xì)胞，而在齲壞牙齒中，不僅成牙本質(zhì)細(xì)胞中有表達(dá)，牙髓細(xì)胞亦出現(xiàn)表達(dá)。此外，MMP-2在深齲組中表達(dá)明顯高于其他兩組，在健康組和淺齲組中表達(dá)無明顯差異。⑵基質(zhì)金屬蛋白酶mmp-2、mmp-9在牙髓損傷和修復(fù)過程中的表達(dá)研究取20-30歲成人新鮮、健康、完整的第三磨牙，高速渦輪手機(jī)備洞至牙本質(zhì)1/2處，然后縱向?qū)⒀例X切成厚約2mm的片狀結(jié)構(gòu)，

6、DMEM培養(yǎng)液體外分別培養(yǎng)7天、14天、21天，免疫組化、RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡檢測mmp-2、mmp-9在其中的表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP-2、MMP-9在3天和21天時(shí)表達(dá)量最高，在7天和14天時(shí)，MMP-2、MMP-9的表達(dá)量較低。 研究表明：①可以成功地在體外建立了牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的培養(yǎng)模型，并可在體外培養(yǎng)長達(dá)21天；②制備窩洞深度不同，牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的反應(yīng)也不同，隨著窩洞制備深度增加，牙髓