Nell-1在小鼠牙胚發(fā)育及人牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中表達(dá)的免疫組化研究.pdf

1、目的:
　　 nel樣Ⅰ型基因（nel-like typeⅠ gene，nell-1）是一種在顱縫早閉者早閉區(qū)過(guò)度表達(dá)的新型基因，因其與在雞神經(jīng)中特異性表達(dá)的nel基因結(jié)構(gòu)十分相似，故命名為nel樣Ⅰ型基因。nell-1基因具有調(diào)節(jié)成骨相關(guān)基因表達(dá)、誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化和促進(jìn)骨質(zhì)形成的作用。其編碼形成的蛋白Nell-1是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種具有類表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子編碼結(jié)構(gòu)并在顱面部等神經(jīng)嵴來(lái)源的組織中特異性表達(dá)的分泌性蛋白。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及體

2、外實(shí)驗(yàn)表明，Nell-1可特異性地誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)礦化，誘導(dǎo)骨的形成及再生。
　　 研究表明，nell-1是Runx2的下游基因，受Runx2的直接調(diào)控。Runx2(Runt-related transcription factor2)，作為骨和牙胚發(fā)育過(guò)程中的重要轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化，調(diào)控相關(guān)目的基因的表達(dá)來(lái)促進(jìn)硬組織的形成和牙胚的發(fā)育。
　　 牙體組織與顱面骨均為神經(jīng)嵴來(lái)源，成牙本質(zhì)細(xì)

3、胞和成骨細(xì)胞都來(lái)源于間充質(zhì)細(xì)胞，基因結(jié)構(gòu)上具有很多相似性;并且nell-1受骨和牙胚發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子Runx2的直接調(diào)控，因此我們推測(cè)Nell-1可能在牙胚發(fā)育，成牙本質(zhì)細(xì)胞分化和牙本質(zhì)形成中同樣發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
　　 基于以上推測(cè)，本課題的目的為通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法研究Nell-1在小鼠牙胚發(fā)育及人牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中的表達(dá)和分布，為研究Nell-1在牙胚發(fā)育和牙本質(zhì)形成的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法、結(jié)果和結(jié)論:<

4、br>　　 實(shí)驗(yàn)一:利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Nell-1在小鼠第一磨牙牙胚發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)和分布，初步研究Nell-1在牙胚發(fā)育中的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示Nell-1在小鼠第一磨牙牙胚發(fā)育過(guò)程中的不同階段呈現(xiàn)不同的表達(dá)和分布。在胚胎第13.5天(E13.5)和E14.5，Nell-1表達(dá)于整個(gè)成釉器和其中周圍的間充質(zhì)細(xì)胞中。在E16.5天，Nell-1在內(nèi)釉上皮層、外釉上皮層、中間層、第二釉結(jié)和牙乳頭細(xì)胞中有表達(dá)。在E18.5天，Nell

5、-1的陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)于發(fā)育中的成釉細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞、中間層及外釉上皮層。在出生后第2.5天(P2.5)、P5和P7，Nell-1表達(dá)于成熟的成釉細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞（包括成牙本質(zhì)細(xì)胞的胞體和突起）以及未成熟的釉質(zhì)中。在P7天出現(xiàn)的上皮根鞘中，Nell-1也呈陽(yáng)性表達(dá)。在P13.5天，Nell-1的陽(yáng)性表達(dá)僅見(jiàn)于縮余釉上皮和成牙本質(zhì)細(xì)胞，而在成熟的釉質(zhì)中無(wú)表達(dá)。在小鼠第一磨牙萌出過(guò)程中(P28)，Nell-1僅在成牙本質(zhì)細(xì)胞的胞體和突起以及血

6、管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。因此，Nell-1在牙胚發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)提示，Nell-1可能在成釉細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化、釉質(zhì)基質(zhì)的分泌和礦化、牙冠的形態(tài)發(fā)生以及牙根形成中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。
　　 實(shí)驗(yàn)二:通過(guò)收集并制備離體人牙標(biāo)本，利用免疫組織化學(xué)技術(shù)，研究Nell-1在人牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中的分布及表達(dá)情況，初步探討Nell-1在牙本質(zhì)形成中的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在正常及齲壞人牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中，Nell-1均表達(dá)于成牙本質(zhì)細(xì)胞（