青光安顆粒劑對體外培養(yǎng)小梁細胞凋亡相關基因產(chǎn)物和細胞外基質(zhì)作用的研究.pdf

1、目的：1．研究分析青光安顆粒劑大鼠含藥血清的指紋圖譜的測定方法；2．建立小梁細胞的體外培養(yǎng)模型；3．初步探討中藥青光安顆粒劑含藥血清對體外培養(yǎng)小梁細胞凋亡相關基因產(chǎn)物的作用機制；4．探討青光安顆粒劑含藥血清是否具有降低小梁細胞分泌細胞外基質(zhì)的作用。 方法：1．不同濃度青光安顆粒劑和益脈康片劑給3月齡SD大鼠灌胃，獲取不同含藥濃度的大鼠血清。2．采用色譜技術對給藥前的藥液成分與給藥后血清中吸收成分的對比，測定青光安顆粒劑大鼠含藥血

2、清的指紋圖譜；3．建立小梁細胞體外培養(yǎng)模型；4．在體外培養(yǎng)小梁細胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的含藥血清，繼續(xù)培養(yǎng)24小時后，收集細胞后，采用流式細胞儀進行細胞凋亡中Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的檢查。5．在體外培養(yǎng)的第三代小梁細胞中加入不同濃度含藥血清，培養(yǎng)24h后，采用放射免疫分析法測定培養(yǎng)液中透明質(zhì)酸、層粘連蛋白、膠原蛋白Ⅲ型的含量。 結果：1．成功獲取中藥的含藥血清，并將其用于小梁細胞的體外培養(yǎng)。2．青光安在體內(nèi)吸收后其含藥血清

3、色譜圖與空白組有明顯區(qū)別，與含藥溶液組既有區(qū)別，又有相同的峰出現(xiàn)。而不同濃度的青光安含藥血清的指紋圖譜均出現(xiàn)相同的波峰，但各峰的面積均有不同。3．含藥血清作用于體外培養(yǎng)的小梁細胞后，Bcl-2的表達隨青光安含藥濃度的增高而增高，Bax的表達隨青光安含藥濃度的增高而降低，青光安20倍組明顯優(yōu)于模型組和空白組(P<0.01)，青光安20倍組優(yōu)于益脈康5倍組(P<0.05)，青光安10倍組與青光安5倍組、益脈康5倍組無顯著性差異。4．含藥血清