精漿中肉毒堿的HPLC測(cè)定及其對(duì)精子質(zhì)量參數(shù)影響的研究.pdf

1、肉毒堿是一種存在于線粒體內(nèi)膜中的極性季胺類化合物，其主要功能是攜帶、轉(zhuǎn)運(yùn)活化的脂肪酸穿越線粒體膜，進(jìn)入線粒體內(nèi)進(jìn)行β-氧化，為機(jī)體的各種代謝活動(dòng)提供能量。近年來，隨著人們對(duì)男性生殖健康的關(guān)注，肉毒堿在男性生殖功能中的作用被人們重新認(rèn)識(shí)，并逐漸成為男科學(xué)領(lǐng)域研究的熱門課題之一。精漿中肉毒堿水平對(duì)精子活力的維持及男性生育能力的評(píng)估具有重要的作用。但是目前國(guó)內(nèi)、外測(cè)定肉毒堿常用的酶法和放射同位素酶法，因存在操作步驟繁瑣，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性受酶活性

2、等因素的影響較大等不足，使其實(shí)際應(yīng)用受到限制。高效液相色譜法測(cè)定生物樣品中肉毒堿水平是近年國(guó)外推薦使用的分析方法，國(guó)內(nèi)尚未見進(jìn)行深入研究。本研究經(jīng)詳細(xì)的方法學(xué)研究，建立了精漿中游離肉毒堿的柱前紫外衍生高效液相色譜測(cè)定方法。在本研究的實(shí)驗(yàn)條件下，肉毒堿與對(duì)溴苯乙?；宸磻?yīng)生成的衍生物穩(wěn)定，且不受樣品中蛋白成分的干擾。色譜保留時(shí)間約為11.2 min，峰形對(duì)稱且分離完全，定量準(zhǔn)確。肉毒堿在Oμmol/L～1000μmol／L濃度范圍線性良好

3、。樣品測(cè)定批間(n=6)及平均批內(nèi)(n=5)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.36％和1.23％，回收率為91.6％～98.7％。樣本處理過程較為簡(jiǎn)便，已成功應(yīng)用于人精漿肉毒堿批量樣品測(cè)定，為進(jìn)一步開展肉毒堿在男性生殖領(lǐng)域的研究和應(yīng)用奠定了方法學(xué)基礎(chǔ)。 本文研究了肉毒堿體外對(duì)人精子活率及運(yùn)動(dòng)參數(shù)的影響，探討了補(bǔ)充適量的肉毒堿對(duì)正常生育男性及不育男性精子質(zhì)量的影響。結(jié)果表明，體外添加適宜濃度的肉毒堿，能顯著提高因精漿肉毒堿水平低下所致

4、弱精癥患者精子的活率、活力及其它運(yùn)動(dòng)參數(shù)，并可顯著減緩正常生育精子活率、活力及運(yùn)動(dòng)參數(shù)的降低。 本文還研究了正常生育男性和不育癥患者精漿中游離肉毒堿水平差異及其對(duì)精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)的影響，以及精漿中游離肉毒堿水平與附性腺生化指標(biāo)之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，正常男性精漿中肉毒堿參考濃度為392.66±107.18 μmol/L，與正常組相比，不育患者精漿中肉毒堿水平明顯降低。相關(guān)性分析顯示，精漿中肉毒堿水平與精子密度、活率、活力及其它各運(yùn)動(dòng)

5、參數(shù)均具有正相關(guān)關(guān)系。此外，相關(guān)性分析還顯示，精漿中肉毒堿水平與α-葡糖苷酶活力具有極顯著的正相關(guān)關(guān)系，與果糖含量存在一定的負(fù)相關(guān)關(guān)系，而與酸性磷酸酶活力無(wú)相關(guān)性。提示精漿中肉毒堿水平高低在一定程度上能反映精液的質(zhì)量以及男性生育能力狀況。檢測(cè)精漿中肉毒堿和α－葡糖苷酶活力可作為評(píng)估附睪功能的生化指標(biāo)，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室條件具備時(shí)，建議應(yīng)同時(shí)檢測(cè)精漿中游離肉毒堿和α-葡糖苷酶水平，以綜合評(píng)估患者附睪功能。同時(shí)，本研究提示提高精漿中肉毒堿水平將有助于