奶粉中肉毒梭菌的檢測.pdf

1、肉毒梭菌歸屬于厭氧性梭狀芽孢桿菌屬，革蘭氏染色為陽性大桿菌（約為4×1μm），多單個存在，菌體兩側平行，兩端鈍園，呈直桿狀或稍彎曲，芽孢位于次級端，大于菌體寬度，呈卵圓形，使菌體呈匙形或網(wǎng)球拍狀。有4～8根周生鞭毛，運動遲緩，無莢膜。
　　肉毒梭菌能產(chǎn)生肉毒毒素（外毒素），是一種神經(jīng)毒素，能導致人體死亡。肉毒毒素不耐熱，沸水煮1min或75℃加熱5～10min毒素就能被完全破壞。毒素被釋放到細菌體外后，在適應的條件下，毒性能被胰酶

2、激活而引起人體中毒。肉毒毒性極強，比氰化鉀毒性還強萬倍。
　　對于食品或者是環(huán)境中肉毒梭菌的檢測都需要進行增菌培養(yǎng)，目的是使其達到一定含量以便檢出，常用的前增菌液有皰肉培養(yǎng)基和胰蛋白酶胰蛋白胨葡萄糖酵母膏(TPGYT)培養(yǎng)基，用以識別肉毒梭菌的培養(yǎng)基有卵黃瓊脂培養(yǎng)基和血平板。肉毒梭菌的快速檢測方法有16SrRNA基因比對法，特異性基因RCR擴增檢測法。
　　通過傳統(tǒng)檢測培養(yǎng)獲得疑似肉毒梭菌的單個菌落，將單個菌落進行增菌培養(yǎng)后

3、獲得大量菌落，便于進一步進行快速檢測，從而確證可疑菌是否為肉毒梭菌。通過16SrRNA基因比對法獲得可疑菌可能是何種菌種的范圍，給定了檢測方向，大大節(jié)約了試驗時間。所有可疑菌16SrRNA基因比對結果發(fā)現(xiàn)，不僅僅只有肉毒梭菌。有些可疑菌的比對結果是蠟樣芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、假蕈狀芽孢桿菌和炭疽芽孢桿菌，有些是乳桿菌，還有些是地衣芽孢桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。16SrRNA基因比對結果給出的只是與可疑菌親緣較近的菌株名稱，是否是還得需要進一

4、步驗證。
　　針對16SrRNA基因比對結果給出的范圍，選擇相應的RCR方法進行驗證，必要時進行全套鑒別生化試驗。最后驗證結果與16SrRNA基因比對結果基本一致，試驗樣品最后分別檢出生孢梭菌、蠟樣芽孢桿菌和乳桿菌。
　　本論文的研究是通過大量抽檢樣品，探索肉毒梭菌及其毒素快速檢測方法(PCR、16SrRNA應用)的有效性。最后還通過最終檢測數(shù)據(jù)，得出奶粉易受哪些非肉毒梭菌的同屬于厭氧芽孢菌屬的其他菌的污染，以及討論這些非肉