益生丁酸梭菌的分離鑒定及對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能和肉品質(zhì)的影響.pdf

1、目前抗生素濫用的危害越來(lái)越嚴(yán)重，而微生態(tài)制劑對(duì)減少甚至替代抗生素的使用，保障動(dòng)物及人類安全有著重要的意義。丁酸梭菌（ Clostridium butyricum）是存在于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的一種厭氧有益菌，能產(chǎn)生芽孢，具有耐高溫、耐酸、耐膽鹽等生物學(xué)特性，與非芽孢菌相比具有更顯著的優(yōu)勢(shì)，是一種新型的微生態(tài)制劑菌種。本研究旨在從動(dòng)物腸道糞便中分離篩選1株丁酸梭菌，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究，然后優(yōu)化其發(fā)酵培養(yǎng)基，最后通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)評(píng)價(jià)其實(shí)際應(yīng)用價(jià)

2、值。具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.丁酸梭菌的分離、篩選與鑒定
　　為了獲得益生丁酸梭菌，本研究通過(guò)處理不同動(dòng)物的糞便進(jìn)行丁酸梭菌的分離，首先對(duì)樣品進(jìn)行80℃水浴10 min除去非芽孢菌后，然后接種到TSN選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行菌株的分離與篩選，對(duì)分離到的不同菌株分別進(jìn)行菌落形態(tài)、顯微形態(tài)初步觀察，對(duì)形態(tài)與丁酸梭菌相似的菌株進(jìn)行產(chǎn)酸能力檢測(cè)，最后對(duì)分離菌株進(jìn)行生理生化鑒定和16S rDNA序列分析。結(jié)果表明分離到1株革蘭氏陽(yáng)性厭氧菌

3、C.B1，菌體呈短桿狀，能形成圓形或橢圓形芽孢，生理生化結(jié)果也符合丁酸梭菌的基本特征，16S rDNA序列分析顯示與丁酸梭菌的同源性高達(dá)99％以上，因此確定該菌株為丁酸梭菌，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)其為新的微生態(tài)制劑奠定了基礎(chǔ)。
　　2.丁酸梭菌C.B1的生物學(xué)特性研究
　　通過(guò)對(duì)丁酸梭菌 C.B1的產(chǎn)酸能力、芽孢形成率、耐熱、耐酸及產(chǎn)酶能力等生物學(xué)特性進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，丁酸梭菌 C.B1具有較好的生長(zhǎng)性能和產(chǎn)酸能力，培養(yǎng)24 h之后

4、會(huì)逐步進(jìn)入穩(wěn)定期，最終pH值會(huì)達(dá)到4.8左右，芽孢形成率也能達(dá)到95%以上。此外，丁酸梭菌 C.B1具有優(yōu)良的生物學(xué)特性，在高溫下仍有下有較高的存活率，有利于微生態(tài)制劑的加工生產(chǎn)；能耐受 pH2.0的酸性環(huán)境和0.3%的膽鹽濃度，使其能順利通過(guò)胃腸道發(fā)揮生物學(xué)功能；整體來(lái)說(shuō)，丁酸梭菌 C.B1由于其優(yōu)良的生物學(xué)功能，具有作為微生態(tài)飼料添加劑候選菌株的巨大潛力。
　　3.響應(yīng)面法優(yōu)化丁酸梭菌C.B1培養(yǎng)基
　　本研究對(duì)丁酸梭菌

5、 C.B1的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，為研制高品質(zhì)的丁酸梭菌微生態(tài)制劑奠定基礎(chǔ)。首先通過(guò)單因素試驗(yàn)確定最佳的碳源和氮源，然后使用二水平的 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)分析培養(yǎng)基中對(duì)菌體生長(zhǎng)影響顯著的主要因素；再通過(guò)最陡爬坡試驗(yàn)對(duì)主要因素進(jìn)行試驗(yàn)，獲得其濃度的最適范圍。最后通過(guò)中心組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)和響應(yīng)面分析得到主要因素的最優(yōu)水平。獲得最優(yōu)的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖1.97%，胰蛋白胨1.81%，酵母膏1.03%，牛肉膏1%，碳酸氫鈉0.23

6、%，硫酸銨0.1%，磷酸氫二鉀0.2%，硫酸鎂0.02%，硫酸錳0.02%，碳酸鈣0.1%，半胱氨酸0.05%，自然 pH。在最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)下，丁酸梭菌C.B1的菌體濃度從可達(dá)到1.10×109 CFU/mL，比原始培養(yǎng)條件下提高了6.73%。
　　4.丁酸梭菌C.B1對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能及肉品質(zhì)的影響
　　在肉鴨飼糧中添加不同劑量的丁酸梭菌 C.B1制劑，結(jié)果表明，在飼糧中添加丁酸梭菌 C.B1制劑能夠提高肉鴨各個(gè)生長(zhǎng)階段的

7、總增重，其中以3.0×108 CFU/kg的丁酸梭菌 C.B1添加量試驗(yàn)組最為顯著，與對(duì)照組相比，平均日增重增加了3.23%（P<0.05）；另外，該組的料重比在1-21 d階段和1-42 d階段與對(duì)照組相比有顯著的降低作用，分別降低了2.13%（P<0.05）和3.83%（P<0.05），能夠達(dá)到改善肉鴨生產(chǎn)性能和提高飼料利用率的作用。
　　在飼糧中添加3.0×107 CFU/kg和3.0×108 CFU/kg的丁酸梭菌C.B1

8、可以顯著降低鴨胸肌的滴水損失率，與對(duì)照組相比分別降低了3.02%（P<0.05）和3.40%（P<0.05）；而且，各試驗(yàn)組胸肌的粗蛋白含量與對(duì)照組相比分別增加了4.88%（P<0.05）、5.41%（P<0.05）和6.14%（P<0.05），其中添加3.0×108 CFU/kg的丁酸梭菌C.B1效果最好；此外，添加3.0×108 CFU/kg的丁酸梭菌C.B1還能顯著提高肉鴨胸肌和腿肌中粗脂肪的含量，與對(duì)照組相比分別增加了9.80%