孕期及哺乳期抵劑量三丁基錫暴露對(duì)子代小鼠生殖、內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響.pdf

1、有機(jī)錫化合物（Organo-tin Compounds）是錫元素和碳元素直接結(jié)合所形成的金屬有機(jī)化合物。通式RnSnX4-n（n=1-4，R為烷基或芳香基），主要有烷基錫化合物和芳香基錫化合物兩類。有機(jī)錫化合物被廣泛用于催化劑、穩(wěn)定劑、農(nóng)用殺蟲劑、殺菌劑以及日常用品的涂料和防霉劑等。由于使用廣泛，有機(jī)錫類化合物已對(duì)全球環(huán)境（尤其是水體環(huán)境）造成了嚴(yán)重污染。有機(jī)錫化合物可經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚吸收[1]。三丁基錫( Tributyltin

2、，TBT)是有機(jī)錫化合物中重要的一種，已有的研究顯示TBT對(duì)哺乳動(dòng)物可產(chǎn)生免疫毒性、神經(jīng)毒性、生殖毒性等。目前關(guān)于低劑量有機(jī)錫化合物暴露的影響研究很少，尤其對(duì)子代的影響研究較少，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)孕期及哺乳期低劑量TBT暴露的孕鼠及其兩代仔鼠的生長(zhǎng)發(fā)育的觀察及早期神經(jīng)行為學(xué)和生化指標(biāo)的測(cè)量，研究了TBT對(duì)兩代仔鼠生殖、內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響。
　　 目的：研究孕期及哺乳期低劑量TBT暴露對(duì)兩代子鼠生長(zhǎng)發(fā)育、早期神經(jīng)行為和生殖及內(nèi)分泌系統(tǒng)的影

3、響，以評(píng)估孕期及哺乳期低劑量三丁基錫暴露對(duì)人類后代可能產(chǎn)生的影響。
　　 方法：⑴將清潔級(jí)健康妊娠KM小鼠隨機(jī)分為100、10、1μg/kg TBT染毒組和陰性對(duì)照組（玉米油），每組6只。從妊娠第6天(GD6)起，采用經(jīng)口灌胃方式進(jìn)行染毒，每天1次，直至哺乳期結(jié)束，灌胃劑量按照每天稱量的體重計(jì)算。F1代子鼠飼養(yǎng)90天，同一劑量組內(nèi)交叉配種。仔鼠在出生后第21天(PND21)斷奶。⑵仔鼠出生后記錄仔鼠數(shù)量、雌雄數(shù)量及體重，觀察有無

4、畸形及死亡情況。仔鼠出生后第1天(PND1)、3、5、7、14、21天時(shí)稱量仔鼠體重，PND12開始觀察仔鼠睜眼情況，PND20開始觀察陰道張開情況，PND21開始觀察雌鼠初潮情況。從PND28開始觀察包皮分離情況。仔鼠斷奶后每周稱量一次體重，計(jì)算體重增加量。PNDs3、5、7、9、14測(cè)量仔鼠翻正時(shí)間（Righting Reflex）和懸崖憎惡反應(yīng)時(shí)間（Cliff-drop Aversion Reflex），PNDs12、14測(cè)量仔鼠

5、前肢握力實(shí)驗(yàn)時(shí)間，PNDs12、14測(cè)量仔鼠垂直網(wǎng)試驗(yàn)時(shí)間，PNDs3、5、7、9、14測(cè)量仔鼠負(fù)趨地性反射時(shí)間，從出生后第8天開始觀察仔鼠聽覺驚愕反射，并記錄出現(xiàn)聽覺驚愕反射陽(yáng)性時(shí)的日齡。⑶PND49時(shí)各劑量組隨機(jī)抽取雌雄各10只仔鼠，取腦，胸腺、睪丸、附睪或子宮、卵巢，稱重并計(jì)算臟器系數(shù)。雄性小鼠觀察精子活力、精子計(jì)數(shù)和精子畸形率等指標(biāo)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析F1代小鼠精子質(zhì)膜完整性及精子染色質(zhì)狀態(tài)。應(yīng)用Western-blo

6、tting技術(shù)分析雄鼠睪丸和雌鼠卵巢中雌激素受體α(ER-α)及雌激素受體β(ER-β)蛋白的表達(dá)，及下丘腦中芳香酶蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TBT對(duì)F0孕鼠具有毒性作用：10μg/kg和100μg/kg劑量組母鼠孕期體重增加量與對(duì)照組相比顯著降低（P＜0.05）。TBT對(duì)F1孕鼠的毒性作用不明顯，各劑量組母鼠孕期體重增加量與對(duì)照組相比無顯著性差異。TBT對(duì)妊娠結(jié)果的影響：F0代和F1代各染毒組母鼠產(chǎn)仔數(shù)量、仔鼠哺

7、乳期死亡率和仔鼠雌雄比例與對(duì)照組相比均無顯著差異(P＞0.05)。①TBT染毒導(dǎo)致F1仔鼠的早期神經(jīng)行為發(fā)育遲緩，100μ,g/kg劑量組在PND7時(shí)及10μg/kg和100μg/kg劑量組在PND5時(shí)翻正反射時(shí)間比對(duì)照組顯著延遲(P＜0.05)，各染毒組在PND3及PND5時(shí)的懸崖憎惡反應(yīng)時(shí)間與對(duì)照組相比顯著延遲(P＜0.05)，100μg/kg劑量組前肢握力時(shí)間及垂直網(wǎng)試驗(yàn)時(shí)間均明顯縮短（P＜0.05）。各染毒組在PND6時(shí)及10μ

8、g/kg和100μg/kg劑量組在PND9時(shí)的負(fù)趨地性反射時(shí)間與對(duì)照組相比顯著延遲(P＜0.05)，各染毒組出現(xiàn)聽覺驚愕反射陽(yáng)性時(shí)的日齡與對(duì)照組相比顯著延遲（P＜0.05）。②F1代雄性小鼠各染毒組精子畸形率與對(duì)照組相比顯著升高(P＜0.05.P＜0.01)；各染毒組包皮分離時(shí)間與對(duì)照組相比顯著延遲（P＜0.05）；各染毒組精子計(jì)數(shù)有減少的趨勢(shì)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析表明F1代雄鼠附睪中精子質(zhì)膜形態(tài)及染色質(zhì)結(jié)構(gòu)也發(fā)生了顯著變化；F

9、2代10μg/kg劑量組仔鼠包皮分離時(shí)間與對(duì)照組相比顯著延遲（P＜0.05）；各染毒組仔鼠精子計(jì)數(shù)與精子畸形率與對(duì)照組相比無顯著差異(P＞0.05)。Western-blotting分析顯示，雌激素受體(ER-α和ER-β)蛋白和芳香酶蛋白在睪丸和卵巢內(nèi)的表達(dá)均是隨著TBT濃度升高逐漸減弱，并呈劑量-效應(yīng)性關(guān)系。
　　 結(jié)論：⑴孕期及哺乳期低劑量的TBT暴露可產(chǎn)生母體毒性，使孕鼠體重增加量降低。并影響子代小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育，對(duì)子代小

10、鼠產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾作用，可以使F1代雌性小鼠性早熟、F1代雄性小鼠性發(fā)育遲緩。⑵孕期及哺乳期低劑量的TBT暴露可導(dǎo)致F1仔鼠的早期神經(jīng)行為發(fā)育遲緩，這可能是TBT作為內(nèi)分泌干擾物對(duì)仔鼠內(nèi)分泌干擾及TBT的神經(jīng)毒性共同作用的結(jié)果。⑶孕期及哺乳期低劑量的TBT暴露影響了子代小鼠精子發(fā)生，精子質(zhì)量、并對(duì)F1雄鼠附睪中精子質(zhì)膜形態(tài)及染色質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。⑷孕期及哺乳期低劑量的TBT暴露使雌激素受體(ER-α和ER-β)在子代睪丸或卵巢組織內(nèi)的表達(dá)及