HCV NS3蛋白對QSG7701細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、丙型肝炎病毒(HCV)是一種與肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)生密切相關(guān)的外部致病因子。HCV感染后可引起慢性肝炎，肝硬化及肝癌等嚴(yán)重后果。目前對其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。HCV屬RNA病毒，無逆轉(zhuǎn)錄酶活性，不能與宿主基因整合。HCV致癌性可能是通過其表達(dá)的蛋白質(zhì)起作用，其中HCV NS3，核心蛋白和NS5蛋白與其致癌性密切相關(guān)。HCV NS3蛋白與HCV的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制有關(guān)，在病毒的生活周期中起重要作用，且可和宿主細(xì)胞蛋白相互作用，與HCV相關(guān)性HCC關(guān)系

2、密切。 細(xì)胞凋亡在清除病毒感染、機(jī)體組織衰老死亡細(xì)胞和變異細(xì)胞等方面起著重要作用。凋亡在HCV相關(guān)性疾病的發(fā)生發(fā)展中廣泛存在，并在肝細(xì)胞癌發(fā)生中起重要作用。已有研究表明，HCV NS3蛋白對不同細(xì)胞的凋亡調(diào)控具有不同的效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)選用人永生化肝細(xì)胞QSG7701建立的穩(wěn)定表達(dá)全長HCV NS3基因的肝細(xì)胞模型，觀察HCV NS3蛋白對該細(xì)胞凋亡的調(diào)控，以探討HCV的致癌機(jī)制。 本實(shí)驗(yàn)采用Western Blot，免疫細(xì)

3、胞化學(xué)鑒定穩(wěn)定表達(dá)HCV NS3蛋白的QSG7701細(xì)胞克隆。用Western Blot，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測未轉(zhuǎn)染組、空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、HCV NS3蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞內(nèi)活化caspase3和survivin表達(dá)的變化；用原位末端標(biāo)記法和流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：HCVNS3蛋白促進(jìn)survivin蛋白的表達(dá)，而對活化easpase3的表達(dá)無明顯影響；各組細(xì)胞凋亡率未見顯著差異。HCV NS3蛋白對QSG7701

4、細(xì)胞的凋亡作用不明顯。 為證實(shí)HCV NS3蛋白對QSG770l細(xì)胞凋亡的潛在影響，將各組細(xì)胞進(jìn)行血清饑餓誘導(dǎo)其凋亡。用Western Blot，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測血清饑餓作用后未轉(zhuǎn)染組、空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、HCV NS3蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞內(nèi)活化caspase3和survivin蛋白表達(dá)的變化；用原位末端標(biāo)記法和流式細(xì)胞術(shù)檢測血清饑餓作用后各組細(xì)胞凋亡率的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：經(jīng)血清饑餓誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，各組細(xì)胞活性caspase3表達(dá)

5、增高、survivin的表達(dá)降低。HCV NS3蛋白表現(xiàn)出抑制活化easpase3的表達(dá)、促進(jìn)survivin的表達(dá)的作用，并且兩者的表達(dá)都呈現(xiàn)時間依賴性和劑量依賴性。同時TUNEL和FCM分析都表明HCV NS3蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率較未轉(zhuǎn)染組和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組低。提示HCV NS3蛋白能抑制血清饑餓所誘導(dǎo)的QSG770l細(xì)胞凋亡。 本研究結(jié)果提示(1)HCV NS3蛋白促進(jìn)人源肝細(xì)胞survivin蛋白的表達(dá)。(2)HC