加味四逆散對肝硬化大鼠胃腸動力變化干預作用實驗研究.pdf

1、目的： 研究加味四逆散對肝硬化大鼠胃腸動力障礙防治作用，并對其機制進行初步探討。通過加味四逆散對肝硬化大鼠一般情況、肝功能、肝臟形態(tài)的療效觀察，對肝硬化大鼠胃電圖異常的防治作用，從胃腸肽角度探討實驗性肝硬化大鼠胃腸動力紊亂的機制以及加味四逆散防治作用。以Icc(Interstitial cells of Cajal，cajal間質細胞)表達c—kit(Ⅲ型跨膜蛋白酪氨酸激酶生長因子受體蛋白)為切入點，研究肝硬化大鼠的c—kit表

2、達量變化，以及加味四逆散對其的影響，以GASR(胃泌素受體)、VIPR2(VIP-2 receptor，血管活性腸肽Ⅱ型受體)為代表，在胃腸組織對胃腸肽受體水平測定探討肝硬化大鼠胃腸動力信號接收系統(tǒng)變化，探討加味四逆散治療機理。 方法： Wister雄性大鼠48只被隨機分為4組，每組12只，除空白組外，其他三組均給予大鼠皮下注射40％CCL4花生油溶液2.5ml/kg，每周2次造模，連續(xù)造模11周。第八周造模同時中藥組

3、用“加味四逆散”煎劑灌胃治療，西藥組以西沙比利灌胃治療，空白、模型組則給予等體積生理鹽水灌胃。于11周末檢測大鼠胃電圖、肝功能、肝組織病理；放免法測定血清、胃、小腸的MTL(Motilin，胃動素)、GAS(gastrin，胃泌素)、VIP(Vosoactiveintestinepoly Peptide，血管活性腸肽)、SS(somatostatins，生長抑素)含量變化。免疫組化法測定胃組織GAS、SS，小腸組織MTL、VIP含量變化

4、；免疫組化法測定胃組織c—kit陽性表達量變化； RT—PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，逆轉錄聚合酶聯(lián)反應)法測定胃組織GASR、空腸組織VIPR2兩種受體mRNA的表達及定量分析，檢測完畢后對空白組、模型組、西藥組及中藥組相應數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計學分析。 結果： (1)模型組一般情況、肝功能、肝臟形態(tài)與空白組相比均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.0

5、5)，加味四逆散組與模型組比較肝功能TP(total protein，總蛋白)、ALB(albumin，白蛋白)含量明顯升高，ALT(alaninetransaminase，谷丙轉氨酶)、AST(aspartate transaminase天冬氨酸轉氨酶)含量明顯下降，均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)；肝組織病理改變明顯減輕；“加味四逆散”組與西藥組比較：肝功能TP、ALB含量明顯升高，ALT、AST含量明顯下降，均有顯著性

6、差異(P＜0.01、P＜0.01或P＜0.05)，肝組織病理改變減輕。 (2)模型組慢波節(jié)律、主功率、主頻率、快波頻率明顯低于正常組(P＜0.05、P＜0.01)，胃電慢波振幅無明顯改變；中藥組慢波節(jié)律、主頻率、主功率、快波頻率與模型組比較明顯增強(P＜0.05、P＜0.01)，胃電慢波振幅無明顯改變，胃電波接近正常對照水平，與西藥組比較慢波節(jié)律及快波頻率均有明顯差異(P＜0.05、P＜0.01)；西藥組主頻率、快波頻率與模型組

7、比較明顯增強(P＜0.05)，主功率、慢波節(jié)律與模型組比較無明顯差異(P＞0.05)。 (3)放免法測定，模型組與空白對照組比較，模型組大鼠血漿及胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量均明顯增加(P＜0.01或P＜0.05)；中藥組與模型組比較，中藥組大鼠血漿及胃組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，腸組織中MTL、SS、VIP的含量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，腸組織中

8、GAS的含量無明顯降低(P＞0.05)。中藥組與西藥組比較血漿MTL，升高明顯(P＜0.05)，VIP明顯降低(P＜0.01)，GAS、SS無明顯差異(P＞0.05)，胃組織中GAS含量明顯升高(P＜0.01)，VIP的含量明顯降低(P＜0.05)，MTL、SS的含量無明顯差距(P＞0.05)，腸組織中GAS的含量明顯升高(P＜0.05)，SS的含量明顯降低(P＜0.05)MTL、VIP的含量無明顯差異(P＞0.05)但有不同程度升高或

9、降低；西藥組與模型組比較大鼠血漿MTL、VIP、SS的含量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，GAS接近(P＞0.05)，胃組織中MTL、GAS、SS、VIP明顯降低(P＜0.05)，腸組織中MTL、GAS、VIP明顯降低(P＜0.05)，SS接近(P＞0.05)。免疫組化法測定，模型組與空白組比較大鼠胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量明顯升高(P＜0.05)。中藥組與模型組比較大鼠胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的

10、含量明顯降低(P＜0.05)，與西藥組比較胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量接近，無明顯差異(P＜0.05)；西藥組與模型組比較大鼠胃腸組織中GAS、MTL，VIP的含量明顯降低(P＜0.05)，SS接近。 (4)各組胃組織c—kit均有陽性表達，肝硬化組與對照組相比c—kit量明顯降低(P＜0.05)。中藥組的陽性表達量與肝硬化組比較明顯升高(P＜0.05)，接近空白組，與西藥組比較明顯升高(P＜0.05)。西藥組與

11、模型組比較陽性表達量無顯著差異(P＞0.05)。 (5)各組在胃組織中GAS受體mRNA均有表達，肝硬化組在胃組織GASRmRNA表達與空白組相比含量明星降低(P＜0.01)；中藥組與肝硬化組比較含量明顯升高(P＜0.01)與西藥組比較明顯升高(P＜0.05)，。在空腸各組VIPR2受體mRNA均有表達，肝硬化組與空白組相比VIPR2mRNA含量升高(P＜0.01)，中藥組與組肝硬化VIPR2mRNA含量明顯降低(P＜0.01)

12、，與西藥組比較明顯降低(P＜0.05)。 結論： 本實驗得出以下結論，(1)加味四逆散：顯著提高TP、ALB含量，降低ALT、AST含量。因此，加味四逆散能有效地保護肝細胞，恢復肝功能，具有較好的防治實驗大鼠肝硬化病理改變的作用。(2)加味四逆散能夠明顯改善實驗性肝硬化大鼠的胃電波異常，從而有明顯促胃動力作用。(3)肝硬化大鼠血漿、胃、小腸不同部位的GAS、SS、MTL、VIP的變化方向基本一致，但程度不一?？赡芘c肝硬化