羥苯磺酸鈣對大鼠2型糖尿病腎病作用機制的研究.pdf

1、羥苯磺酸鈣(Calciumdobesilate)是一種微血管保保護劑，具有降低血小板粘附和血粘度，改善微循環(huán)障礙等作用，現(xiàn)主要應用于糖尿病微血管病變，，但是在治療2型糖尿病腎病方面報道甚少。為此，本課題一方面觀察羥苯磺酸鈣對高糖誘導的系膜細胞增殖及蛋白激酶C(PKC)表達的影響；另一方面觀察羥苯磺酸鈣對大鼠糖尿病腎病的作用，初步探討羥苯磺酸鈣防治DN的作用機制，為將其開發(fā)應用于臨床防治糖尿病腎病提供理論依據(jù)。 第一部分羥苯磺酸鈣

2、對高糖誘導的大鼠系膜細胞增殖的影響 目的:觀察羥苯磺酸鈣對體外培養(yǎng)的高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞增殖的影響。 方法:高糖濃度采用30mmol·L-1。用不同劑量的羥苯磺酸鈣(5μmol·L-1，10μmol·L-1，20μmol·L-1，50μmol·L-1，100μmol·L-1)處理體外培養(yǎng)的高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞，與未用羥苯磺酸鈣處理的體外培養(yǎng)的高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞同步培養(yǎng)。24h后用MTT法測定并比

3、較系膜細胞增殖水平。 結(jié)果:與未用羥苯磺酸鈣處理的高糖對照組比較，當羥苯磺酸鈣濃度為5μmol·L-1時，膜細胞的增殖未受到抑制(P＞0.05)：當羥苯磺酸鈣濃度等于或大于10μmol·L-1時，系膜細胞的增殖明顯受到抑制，且其抑制作用呈劑量依賴性增強(P＜0.05)。 結(jié)論:羥苯磺酸鈣能抑制高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞的增殖。 第二部分羥苯磺酸鈣對高糖誘導的大鼠系膜細胞PKC表達的影響 目的:探討對羥

4、苯磺酸鈣高糖誘導的大鼠系膜細胞PKC表達的影響。 方法:在大鼠腎小球系膜細胞培養(yǎng)基中加入低糖(5.6mmol·L-1)和高糖(30mmol·L-1)分別作為正常對照組和高糖對照組，同時采用不同劑量的羥苯磺酸鈣(10μmol·L-1，20μmol·L-1，100μmol·L-1)處理高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞。同步培養(yǎng)72h后收集細胞，應用RT-PCR和Western的方法測定PKC的基因表達和蛋白表達。 結(jié)果:與正常對

5、照組比較，其它實驗組PKC的表達顯著增高(P＜0.05)；與高糖對照組比較，羥苯磺酸鈣可呈劑量依賴性的抑制PKC的表達(P＜0.05)。 結(jié)論:高糖能顯著上調(diào)系膜細胞PKC的表達，羥苯磺酸鈣能明顯抑制高糖誘導的系膜細胞PKC的表達，提示羥苯磺酸鈣具有抗腎纖維化的作用，因此可能對DN具有防治作用。 第三部分羥苯磺酸鈣對2型糖尿病大鼠腎臟病變的作用 目的:研究羥苯磺酸鈣對2型糖尿病大鼠腎臟病變的作用。 方法

6、:復制2型糖尿病大鼠模型。30只SD雄性大鼠隨機分為正常對照組、糖尿病大鼠對照組和羥苯磺酸鈣治療組。觀察第24周末各實驗組的血糖、尿白蛋白排泄率、血脂、尿素氮、腎重/體重比值及病理變化，用免疫組化、Westernblot的方法分別檢測各組腎組織中PKC蛋白表達的水平。用質(zhì)譜分析儀分析羥苯磺酸鈣和肌酐結(jié)合情況。 結(jié)果:羥苯磺酸鈣對血糖無影響。糖尿病大鼠組較正常對照組尿白蛋白排泄率、膽固醇明顯增高(P＜0.05)，腎重/體重比值明顯

7、上升(P＜0.05)，系膜增生和基底膜增厚明顯(P＜0.05)，PKC在組織中的蛋白表達顯著增加(P＜0.05)；而羥苯磺酸鈣治療組較糖尿病大鼠對照組尿白蛋白排泄率減少，血肌酐、尿素氮水平明顯降低(P＜0.05)，腎重/體重比值明顯下降(P＜0.05)，系膜增生和基底膜增厚有所減輕(P＜0.05)，PKC在腎組織中的蛋白表達明顯受到抑制(P＜0.05)。 結(jié)論:早期應用羥苯磺酸鈣可減少糖尿病大鼠的尿蛋白排泄、降低血肌酐和尿素氮，