生松素對大鼠糖尿病腎病的治療作用及其機制的研究.pdf

1、目的：研究生松素對大鼠糖尿病腎病的治療作用；并對其作用機制進行初步研究,為生松素作為 DN治療藥物提供實驗證據(jù)。
　　方法：選用健康雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠50只,體重180-200g，隨機選擇46只建立糖尿病腎?。―iabeticNephropathy，DN）模型,4只作為正常對照組（N組,n=4）。造模采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)+一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(StreptozotocinSTZ40mg·kg-1)建立

2、。以STZ注射72h小時后隨機血糖連續(xù)3天≥16.7mmol/L，1月后以尿量≥原尿量150％,尿蛋白定量≥30mg/24h作為大鼠DN造模成功標準。成功復制出32只大鼠DN模型，隨機分為4組，高劑量生松素(40mg·kg-1d-1)治療組（H組,n=8）,低劑量生松素(20mg·kg-1d-1)治療組（L組,n=8），纈沙坦(30mg·kg-1d-1)治療組（V組,n=8），模型組（M組,n=8）。生松素及纈沙坦均溶于生理鹽水配成1%

3、的濃度，H組、L組分別予以生松素40mg·kg-1d-1、20mg·kg-1d-1生理鹽水混懸液灌胃，V組予以30mg·kg-1d-1纈沙坦生理鹽水混懸液灌胃，M組和N組予以等量生理鹽水灌胃。分別于大鼠造模前及成模時、藥物干預后第4、8、12周末，斷尾取血測定隨機血糖、稱量體重、代謝籠收集24小時尿液檢測尿蛋白定量。12周末集體予以戊巴比妥鈉麻醉處死，收集血標本測定血清肌酐(Scr)、血清總甘油三酯(TG)、血清總膽固醇(TC)水平；采

4、取ELISA測定血清AngⅡ水平。取出大鼠雙腎，去除包膜并稱重，取其平均值，計算腎臟肥大指數(shù)：腎重/體重。采用HE染色和PAS染色評估腎臟病理改變。免疫組化染色檢測核因子κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB)在腎臟的表達情況。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料統(tǒng)計結(jié)果以均數(shù)±標準差(x±S)表示，符合正態(tài)、方差齊性的數(shù)據(jù)多組比較采用方差分析，采用LSD檢驗進行組間比較，以P＜0.05為差異有

5、統(tǒng)計學意義，采用秩相關(guān)分析檢驗相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)rs表示兩指標相關(guān)程度，以P＜0.05為有兩者有相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　?。?）各組血糖、體重分析：造模成功時、藥物干預后第4周、8周和12周末時，H組、L組、V組和 M組4組血糖均明顯高于N組（26.05+4.40mmol/L,26.25+4.05mmol/L,26.59+3.11mmol/L,26.58+4.27mmol/L,vs.6.38+0.38mmol/L，P<0.01

6、），體重均明顯低于N組（332.31+38.13g,329.99+42.95g,333.78+35.58g,326.81+51.01g vs.412.58+32.73g,P<0.01）；H組、L組、V組和 M組之間血糖和體重比較均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；DN模型建立成功，分組符合隨機原則。
　　（2）腎臟肥大指數(shù)(（KW/BW)×103）分析：各DN組分別與N組比較，腎臟肥大指數(shù)均明顯升高（5.91+0.83,5.66+0.

7、21,5.95+0.88,7.08+1.33vs.3.19+0.09,P<0.01）；H組、L組、V組和M組比較腎臟肥大指數(shù)均明顯降低（5.91+0.83,5.66+0.21,5.95+0.88 vs.7.08+1.33,P<0.05）；H組、L組、V組之間兩兩比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　?。?）各組大鼠生化指標分析：各組大鼠Scr、TC水平均在正常范圍，且無統(tǒng)計學差異（P>0.05），M組的TG水平比N組明顯上升（4.

8、47+1.45mmol/L vs.1.49+0.11mmol/L, P<0.01），H組、L組與M組比較TG水平均明顯下降（1.30+0.56mmol/L,1.62+0.63mmol/Lvs.4.47+1.45mmol/L,P<0.01），H組與L組，V組與M組之間比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　（4）24h尿蛋白定量變化：造模成功時，H組、L組、V組、M組與N組比較，尿蛋白定量均明顯升高（59.82+17.67mg，55

9、.20+20.09mg，55.02+27.18mg，52.46+13.08mg vs.1.10+0.20mg，P<0.01），H組、L組、V組、M組尿蛋白定量組間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。在藥物干預后各測試點，H組、L組、V組、M組與N組比較，尿蛋白定量均明顯升高（P<0.01）；但與M組比較，H組、L組、V組的尿蛋白定量均明顯降低（48.70+9.54mg，52.25+20.67mg，45.75+18.00mg vs.96.47+

10、56.91mg，P<0.01），H組、L組、V組各組間比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　?。?）腎臟形態(tài)變化(HE染色和PAS染色分析)：H組、L組、V組和M組大鼠腎小球系膜基質(zhì)和基底膜呈不同程度增生，球囊粘連，面積增大，部分腎小管出現(xiàn)細胞空泡樣變性，管腔變窄，未見典型結(jié)節(jié)樣硬化。N組大鼠腎小球病理基本正常，未見上述病變。分別與N組相比，各DN組系膜增殖評分（mesangial expansion index MEI)均明顯升

11、高（1.14+0.08、1.37+0.41、0.89+0.42、1.93+0.04 vs.0.15+0.04，P<0.01）；分別與M組相比，H組、L組、V組的MEI均明顯降低（1.14+0.08、1.37+0.41、0.89+0.42 vs.1.93+0.04，P<0.01）；V組明顯低于L組（0.89+0.42 vs.1.37+0.41，P<0.01）；V組MEI略低于H組，H組略低于L組，但H組、L組、V組之間無統(tǒng)計學差異（P>0

12、.05）。
　?。?）各組大鼠血清AngⅡ濃度分析：M組與N組比較血清AngⅡ濃度明顯升高（4868.41+2084.93 vs.296.48+54.39,P<0.01）；H組、L組、V組與 M組比較血清AngⅡ濃度明顯降低（1030.55+312.56、1386.52+522.47、704.14+352.37vs.4868.41+2084.93,P<0.01）；H組、L組、V組之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　?。?）

13、各組大鼠腎組織NF-κB表達分析：M組與N組比較，腎組織NF-κB表達明顯升高（0.33+0.03 vs.0.06+0.01,P<0.01）；H組、L組、V組與M組比較，腎組織NF-κB表達明顯降低（0.19+0.03,0.23+0.04,0.16+0.04 vs.0.33+0.03,P<0.01）；H組、L組、V組之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.生松素能降低大鼠DN的蛋白尿、血TG、減輕腎臟肥大、改