清潤方對糖尿病的治療作用及其機制的實驗研究.pdf

1、隨著我國社會經(jīng)濟的發(fā)展，人民生活方式改變，體力活動減少以及肥胖的增加等因素導致糖尿病患病人數(shù)驟增。2010年《新英格蘭醫(yī)學雜志》發(fā)文指出中國20歲以上成人糖尿病的患病率高達9.7％，糖尿病前期的患病率達15.5％，已成為嚴重危害群眾健康的公共健康問題。中醫(yī)藥一直在糖尿病的防治方面做著積極的努力，中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院林蘭教授歷經(jīng)40余年臨床與科研創(chuàng)立的糖尿病中醫(yī)三型辨證理論(陰虛熱盛、氣陰兩虛、陰陽兩虛)，客觀的反應(yīng)了糖尿病中醫(yī)證型的

2、動態(tài)演變規(guī)律，有效地指導了糖尿病中醫(yī)治療的臨床實踐。清潤方(由知母、黃柏、酒大黃等組成)專為糖尿病早期的陰虛熱盛型而設(shè)，以滋陰清熱法治療糖尿病早期陰虛熱盛患者臨床療效顯著。本研究以清潤方為研究對象，利用糖尿病模型大鼠觀察了不同劑量清潤方對糖尿病大鼠糖代謝的影響，并從脂代謝、肝臟炎癥與氧化應(yīng)激、骨骼肌糖代謝關(guān)鍵基因mRNA表達等方面探討了其發(fā)揮作用可能的機制，以期為清潤方在糖尿病治療中的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)與數(shù)據(jù)支撐。
　　1.文獻

3、綜述：本部分分別從糖尿病與胰島素抵抗的關(guān)系、胰島素抵抗相關(guān)機制(脂代謝紊亂、炎癥與氧化應(yīng)激、骨骼肌胰島素抵抗)的研究現(xiàn)狀、清潤方組方原理與方中單味中藥現(xiàn)代藥理研究及中藥治療糖尿病研究進展等方面對本研究依托的研究基礎(chǔ)進行了綜述。
　　2.實驗研究：包括以下四個基礎(chǔ)實驗。
　　2.1清潤方對實驗性糖尿病大鼠糖代謝及胰腺病理學形態(tài)的影響
　　目的：觀察清潤方對糖尿病大鼠糖代謝及胰腺病理學形態(tài)的影響。
　　方法：利用鏈脲

4、佐菌素(streptozotocin，STZ)聯(lián)合高糖高脂飼料的方法建立糖尿病大鼠模型。將實驗動物分為空白對照組、模型組、清潤方小、中、大劑量組(0.5，1，2 g·kg-1·d-1)、二甲雙胍組(150mg·kg-1·d-1)，各治療組分別灌胃給予相應(yīng)藥物治療。干預治療4周后檢測各組大鼠體重、空腹血糖(FBG)、血清胰島素水平、口服糖耐量曲線下面積(AUC)，計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)與胰島素抵抗指數(shù)(IRI)，光鏡、電鏡下觀察胰腺

5、病理形態(tài)學改變。
　　結(jié)果：清澗方中、大劑量組和二甲雙胍組較模型組FBG降低(P<0.05)；清潤方各劑量組和二甲雙胍組AUC均有不同程度的降低(P<0.05)；清潤方中、小劑量組和二甲雙胍組較模型組ISI升高，胰島素抵抗指數(shù)IRI降低(P<0.05)；清潤方中、小劑量組和二甲雙胍組肝糖原含量升高(P<0.05)；光鏡下顯示清潤方中、大劑量組及二甲雙胍組胰島數(shù)目的減少有所好轉(zhuǎn)，雖大部分胰島體積明顯縮小，仍可見較大的胰島；電鏡下清潤

6、方各劑量組及二甲雙胍組胰島β細胞內(nèi)分泌顆粒較模型組增多。
　　結(jié)論：清潤方有降低糖尿病大鼠血糖的作用，其機制與改善糖尿病大鼠的胰島素抵抗，保護胰島功能，促進糖尿病大鼠對葡萄糖的利用及肝糖原的合成有關(guān)。
　　2.2清潤方對實驗性糖尿病大鼠脂代謝及肝臟病理學形態(tài)的影響
　　目的：觀察清潤方對糖尿病大鼠脂代謝及肝臟病理形態(tài)學的影響，探討其在脂代謝方面改善胰島素抵抗的作用。
　　方法：各組大鼠藥物干預4周后取大鼠血清及肝

7、臟組織，全血自動生化分析儀COD-PAP法測定總膽固醇(TCHO)，GPO-PAP法測定三酰甘油(TG)，清除法測定高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)與低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)；銅顯色法測定血清游離脂肪酸水平；光鏡下觀察肝臟病理形態(tài)學改變。
　　結(jié)果：與模型組比較，清潤方中、大劑量組糖尿病大鼠的TCHO、LDL-C水平降低(P<0.05)，清潤方各劑量組和二甲雙胍組糖尿病大鼠的HDL-C水平升高(P<0.05)，TG水平有降

8、低趨勢但無統(tǒng)計學差異；清潤方中、小劑量組和二甲雙胍組大鼠血清游離脂肪酸水平降低(P<0.05)；光鏡下顯示清潤方中、大劑量組和二甲雙胍組對肝臟的脂肪沉積有改善作用。
　　結(jié)論：清潤方有改善糖尿病大鼠脂代謝紊亂，抑制脂肪在肝臟沉積的作用。清潤方對糖尿病大鼠“脂毒性”的改善是其發(fā)揮抗糖尿病大鼠胰島素抵抗的機制之一。
　　2.3清潤方對實驗性糖尿病大鼠肝臟炎癥及氧化應(yīng)激的影響
　　目的：觀察清潤方對糖尿病大鼠肝臟炎癥反應(yīng)及氧

9、化應(yīng)激的影響，探討其對肝臟胰島素抵抗的作用機制。
　　方法：各組大鼠藥物干預4周后取大鼠肝臟組織，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法測定肝臟組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)及白細胞介素6(IL-6)含量；比色法測定肝臟組織丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。
　　結(jié)果：與模型組比較，清潤方各劑量組肝組織TNF-α水平降低(P<0.05)，清潤方小、大劑量組肝組織IL-6水平降低(P<0.05)，清潤方中劑量組肝組

10、織IL-6水平有降低趨勢，但無統(tǒng)計學差異；清潤方中、小劑量組及二甲雙胍組肝臟組織MDA含量降低(P<0.05)，清潤方中、大劑量組肝臟組織SOD活性提高。
　　結(jié)論：清潤方有降低肝臟組織炎癥因子含量，促進氧自由基清除，減輕組織損傷的作用?？刂坡匝装Y和減少氧化應(yīng)激的損傷是清潤方改善肝臟胰島素抵抗的重要機制。
　　2.4清潤方對實驗性糖尿病大鼠骨骼肌GLUT-4、INSR mRNA表達的影響
　　目的：觀察清潤方對糖尿病

11、大鼠骨骼肌GLUT-4、INSR mRNA表達的影響，探討其對外周胰島素抵抗中骨骼肌胰島素抵抗的作用機制。
　　方法：各組大鼠藥物干預4周后無菌條件下，取左后腿骨骼肌組織，利用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)檢測骨骼肌組織GLUT-4、INSR mRNA的表達。
　　結(jié)果：與模型組相比，清潤方中、大劑量組和二甲雙胍組GLUT-4 mRNA表達升高(P<0.05)，INSR mRNA表達雖有升高趨勢，但無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：

12、清潤方上調(diào)糖尿病大鼠骨骼肌GLUT-4mRNA表達，促進糖尿病大鼠骨骼肌對葡萄糖的利用，是其發(fā)揮改善糖尿病大鼠外周組織骨骼肌胰島素抵抗的作用機制之一。
　　綜上所述，本研究顯示清澗方有降低實驗性糖尿病大鼠血糖、改善胰島素抵抗、保護胰島功能的作用，其發(fā)揮作用的機制可能與改善實驗性糖尿病大鼠的脂代謝，減輕脂毒性；控制肝臟慢性炎癥和減少氧化應(yīng)激的損傷改善肝臟胰島素抵抗；上調(diào)骨骼肌組織GLUT-4 mRNA表達，促進糖尿病大鼠骨骼肌對葡萄