FRH方的提取工藝及其對(duì)糖尿病腎病的作用和作用機(jī)理研究.pdf

1、第一部分FRH方提取工藝及提取物質(zhì)量控制研究 摘要：目的 對(duì)FRH方提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，制定合理、可行、穩(wěn)定的制備工藝。方法(1)對(duì)FRH方的提取方法進(jìn)行考察，確定最佳提取方法。(2)采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)L<,9>(3<'4>)優(yōu)選最佳提取條件。(3)采用HPLV法測(cè)定方中莫諾苷和馬錢(qián)子苷的含量。(4)采用UV法測(cè)定方中總多糖的含量。結(jié)果FRH方的最佳提取方法為水煎煮提取，最佳提取條件為：每次8倍水，煎煮3次，每次90分鐘。結(jié)論確定

2、了FRH方的提取制備工藝。 二、FRH方提取物的質(zhì)量控制研究 摘要： 目的進(jìn)行FRH方提取物的質(zhì)量控制研究，提供穩(wěn)定、可重現(xiàn)性的質(zhì)控手段。方法(1)通過(guò)HPLC法測(cè)定FRH方提取物和山茱萸中莫諾苷和馬錢(qián)子苷含量。(2)通過(guò)直觀、簡(jiǎn)便的UV法測(cè)定FRH方提取物和黃芪中多糖的含量。 (3)對(duì)提取物和山茱萸中莫諾苷和馬錢(qián)子苷進(jìn)行了薄層鑒別。結(jié)果莫諾苷在6.3～31.5μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999

3、5)，加樣回收率為99.43％，RSD為1.04％；馬錢(qián)子苷的在3.4～17.0μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9996)，加樣回收率為99.10％，RSD為1.49％；多糖的線性范圍為20～120μg／ml(r=0.9995)，加樣回收率為99.16％，RSD為0.89％。結(jié)論制定了FRH方提取物的質(zhì)量控制的有效方法。 第二部分FRH方對(duì)糖尿病腎病的作用及作用機(jī)理研究 一、FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠體重、飲水量

4、、進(jìn)食量及血糖的影響 摘要：目的觀察FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠一般體征和血糖的影響。方法腹腔注射STZ60mg．Kg<'-1>以造成糖尿病大鼠。注射1周后測(cè)定大鼠血糖，若血糖≥16.7mM者則納入為糖尿病大鼠，并按血糖值范圍隨機(jī)分為模型組、氨基胍組(0.1g.kg<'-1>)和FRH組(1.1、2.2g.kg<'-1>)，同期另設(shè)一正常組，各組連續(xù)灌胃12周。于給藥后第3、6、9、12周，分別測(cè)定大鼠體重，每天測(cè)定大鼠飲水量、進(jìn)

5、食量并統(tǒng)計(jì)每3周數(shù)據(jù)；于給藥第6、12周測(cè)定大鼠血糖；于給藥后第12周測(cè)定大鼠糖化血紅蛋白，動(dòng)態(tài)觀察糖尿病大鼠的演變及FRH方的防治作用。結(jié)果FRH方能降低糖尿病腎病大鼠的血糖、飲水量和進(jìn)食量，對(duì)其體重減輕有修復(fù)作用。結(jié)論FRH方對(duì)糖尿病腎病癥狀具有一定的改善作用。 二、FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠胸主動(dòng)脈、胰腺及腎組織形態(tài)學(xué)的影響 摘要： 目的從形態(tài)學(xué)的角度探討FRH方是否具有防治糖尿病腎病的作用。方法腹腔注射STZ

6、60mg.kg<'-1>以造成糖尿病大鼠。注射1周后測(cè)定大鼠血糖，若血糖值≥16.7mM者則納入為糖尿病大鼠，將糖尿病大鼠隨機(jī)分為模型組、FRH組(1.1、2.2g.kg<'->)和氨基胍組(0.1g.kg<'-1>)，同期另設(shè)一組正常對(duì)照組。各組連續(xù)灌胃給藥12周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用光鏡的方法觀察胸主動(dòng)脈、腎臟、胰腺的病理改變。結(jié)果模型組胸主動(dòng)脈在形態(tài)學(xué)上呈一定的病理改變，如輕度增厚，增厚區(qū)域可見(jiàn)管壁有少量泡沫細(xì)胞沉著；胰腺中胰島數(shù)量減少、

7、體積變小，存留的胰島組織松散；腎小球基質(zhì)增厚、毛細(xì)血管腔不明顯，腎小管上皮細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的胞漿透亮。而FRH組和氨基胍組上述病變均有不同程度的減輕。結(jié)論FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠形態(tài)學(xué)病理改變有改善作用，我們推斷FRH方對(duì)糖尿病腎病所引起的結(jié)構(gòu)和功能改變都具有一定的防治作用。 三、FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠腎功能的影響 摘要： 目的 觀察FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠腎功能的影響。方法 腹腔注射STZ60mg.kg<'-1>以

8、造成糖尿病大鼠。注射1周后測(cè)定大鼠血糖，若血糖≥16.7mM者則納入為糖尿病大鼠，并按血糖值范圍隨機(jī)分為模型組、氨基胍組(O.1g.kg<'-1>)和FRH組(1.1、2.2g.kg<'-1>)，同期另設(shè)一正常組，各組連續(xù)灌胃12周。于給藥后第6、12周，測(cè)定血肌酐、血尿素氮、尿微量白蛋白，于給藥后第12周，測(cè)定大鼠腎臟重量，觀察糖尿病大鼠的演變及FRH方的防治作用。結(jié)果FRH方能降低糖尿病腎病大鼠的血肌酐、血尿素氮和尿微量白蛋白的水平

9、，并能抑制腎臟肥大，與模型組相比有顯著差異。結(jié)論FRH方對(duì)糖尿病大鼠腎功能有保護(hù)作用。 四、FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠血清 中SOD、MDA的影響 摘要： 目的 通過(guò)對(duì)血清SOD、MDA值的變化分析，初步探討由STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠模型的氧化應(yīng)激現(xiàn)象，以及FRH方的保護(hù)作用。方法 腹腔注射STZ60mg.kg<'-1>以造成糖尿病大鼠。注射1周后測(cè)定大鼠血糖，若血糖值≥16.7mM者則納入為糖尿病大鼠，將糖尿病大鼠

10、隨機(jī)分為模型組、FRH組(1.1、2.2g.kg<'-1>和氨基脈組(0.1g.kg<'-1>),同期另設(shè)一組正常組。各組連續(xù)灌胃給藥12周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清SOD的活力，以TBA法測(cè)定MDA的含量。結(jié)果 造模12周后，糖尿病腎病大鼠血清SOD活力值較下常組顯著降低，MDA水平升高；而FRA方及氨基脈均能顯著恢復(fù)SOD的活力，降低MDA的水平。結(jié)論FRH方對(duì)由糖尿病腎病引起的氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。 FRH

11、方的提取工藝及其對(duì)糖尿病腎病的作用和作用機(jī)理研究五、FRH方對(duì)糖尿病腎病大鼠MMP-2及TIMP-2表達(dá)的影響摘要：目的 觀察FRH方對(duì)糖尿病大鼠腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表達(dá)的影響。方法腹腔注射STZ60mg.kg<'-1>。以造成糖尿病大鼠。注射1周后測(cè)定大鼠血糖，若血糖≥16.7mM者則納入為糖尿病大鼠，并按血糖值范圍隨機(jī)分為模型組、氨基胍組(0.1g．Kg<'-1>)和F

12、RH組(1.1、2.2g．Kg<'-1>)，同期另設(shè)一正常組，各組連續(xù)灌胃12周。給藥12周后，大鼠取血處死后，迅速取出右腎固定，制片，顯色，用免疫組化的方法觀察MMP-2和TIMP-2的表達(dá)，并采用寧闕圖像分析軟件進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果模型組大鼠腎小球和腎小管中MMP-2陽(yáng)性染色較少，強(qiáng)度較弱。HMP-2染色多量，強(qiáng)度中等。腎小管擴(kuò)張，被急慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，形成膿腫；而氨基胍組和FRH方組MMP-2在腎小球和腎小管中表達(dá)均增強(qiáng)，TIMP-2