CYP2E1在1,2-二氯乙烷中毒性肝損傷中作用的研究.pdf

1、1，2-二氯乙烷(1，2-Dichloroethane，1，2-DCE)為工業(yè)生產(chǎn)中常用的有機(jī)溶劑之一，主要用于粘合劑、溶劑、氯代烴（氯乙烯樹(shù)脂）的生產(chǎn)等，也用作谷物和糧倉(cāng)的熏蒸劑。1，2-DCE屬高毒類(lèi)，易經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚吸收并快速分布到全身特別是脂質(zhì)與類(lèi)脂質(zhì)豐富的組織與器官。肝臟是1，2-DCE中毒的靶器官之一，其職業(yè)中毒患者可出現(xiàn)肝臟腫大，肝穿刺可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹和局灶性壞死等。然而迄今，1，2-DCE引起肝損傷的機(jī)制尚不十分清

2、楚。
　　 細(xì)胞色素P4502E1(cytochrome P4502E1，CYP2E1)是細(xì)胞色素P450的重要亞型，主要表達(dá)于肝組織中，是肝組織中氯代烴類(lèi)化學(xué)物質(zhì)的主要代謝酶。CYP2E1的表達(dá)受其代謝底物的調(diào)控，在對(duì)氯代烴類(lèi)化學(xué)物質(zhì)的代謝過(guò)程中，由于其具有較強(qiáng)NADPH氧化酶活性，故在代謝過(guò)程中可介導(dǎo)生成活性氧自由基，如超氧陰離子自由基和過(guò)氧化氫等；另一方面，氯代烴類(lèi)化學(xué)物質(zhì)經(jīng)CYP2E1代謝后，會(huì)產(chǎn)生毒性更強(qiáng)的中間代謝產(chǎn)物

3、。因此，1，2-DCE對(duì)CYP2E1的誘導(dǎo)及CYP2E1對(duì)1，2-DCE代謝過(guò)程引起的肝臟氧化損傷，成為1，2-DCE中毒性肝損傷的重要機(jī)制之一。
　　 本文以昆明種小鼠為研究對(duì)象，通過(guò)給予CYP2E1的抑制劑，抑制CYP2E1的表達(dá)，探討CYP2E1在1，2-DCE中毒性肝損傷中的作用，從而為1，2-DCE中毒性肝損傷的機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組
　　 (1

4、)1，2-DCE對(duì)小鼠肝微粒體CYP2E1表達(dá)的影響及與肝損傷的關(guān)系
　　 將昆明種小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組及低、中和高劑量1，2-DCE染毒組，共4組，每組8只小鼠。1，2-DCE染毒劑量分別是：0.225g/m3、0.45g/m3和0.9g/m3。采用靜式吸入方式染毒，每天染毒3.5小時(shí)，連續(xù)染毒10天。末次染毒的次日處死小鼠，快速取血及肝組織進(jìn)行各指標(biāo)的檢測(cè)。
　　 (2)CYP2E1抑制劑二烯丙基硫化物(DAS)對(duì)1，

5、2-DCE肝損傷作用的影響
　　 將昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、玉米油對(duì)照組、抑制劑對(duì)照組、單純?nèi)径窘M及低和高劑量DAS干預(yù)組，共6組，每組10只。玉米油對(duì)照組小鼠灌胃給予玉米油，抑制劑對(duì)照組小鼠灌胃給予300g/kg DAS，低和高劑量DAS干預(yù)組小鼠給予150g/kg、300g/kg DAS。將DAS溶解于玉米油中，于染毒前4h分別進(jìn)行灌胃，各組小鼠灌胃的體積相同。單純?nèi)径窘M小鼠、低和高劑量DAS干預(yù)組進(jìn)行0.9g/m31

6、，2-DCE的靜式吸入染毒，每天染毒3.5小時(shí)，連續(xù)染毒10天，末次染毒次日處死小鼠，快速取血及肝組織進(jìn)行各指標(biāo)的檢測(cè)。
　　 2、檢測(cè)指標(biāo)與方法
　　 (1)肝組織病理學(xué)觀察：HE染色。
　　 (2)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性：賴(lài)氏法。
　　 (3)肝組織中谷胱甘肽(GSH)含量：DTNB改良比色法。
　　 (4)肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性：黃嘌呤氧化酶法。<

7、br>　　 (5)肝組織中丙二醛(MDA)含量：硫代巴比妥酸法。
　　 (6)CYP2E1酶活性：苯胺羥化酶法。
　　 (7)CYP2E1蛋白表達(dá)：western blot方法。
　　 3、統(tǒng)計(jì)分析
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間兩兩比較采用LSD法，以P＜0.05作為顯著性差異的判定標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)

8、果:
　　 肝組織病理學(xué)觀察顯示，中、高劑量染毒組小鼠肝細(xì)胞體積增大，胞漿疏松，可見(jiàn)程度不等的空泡變性；高劑量染毒組小鼠血清中ALT活性顯著高于對(duì)照組；中、高劑量染毒組小鼠肝微粒體CYP2E1活性和蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比均顯著升高；中、高劑量染毒組小鼠肝組織中GSH含量及高劑量染毒組小鼠肝組織中SOD活性顯著低于對(duì)照組，高劑量染毒組小鼠肝組織中MDA含量顯著高于對(duì)照組。
　　 中、高劑量DAS干預(yù)組肝微粒體CYP2E1蛋白

9、表達(dá)和酶活性顯著低于單純?nèi)径窘M；高劑量DAS干預(yù)組GSH含量和SOD活性與單純?nèi)径窘M相比明顯升高，而MDA含量明顯下降；高劑量DAS干預(yù)組小鼠血清中ALT活性顯著低于單純?nèi)径窘M；肝組織病理學(xué)觀察顯示，高劑量DAS干預(yù)組小鼠肝細(xì)胞病理?yè)p傷得到明顯改善。
　　 結(jié)論:
　　 1、1，2-DCE染毒可導(dǎo)致肝組織出現(xiàn)明顯氧化損傷。
　　 2、1，2-DCE染毒可誘導(dǎo)肝微粒體CYP2E1的表達(dá)。
　　 3、CYP2