甜櫻桃自交不親和基因型AS-PCR鑒定技術(shù)研究及應(yīng)用.pdf

1、自交不親和是高等植物在進(jìn)化過(guò)程中為保持遺傳變異而發(fā)展起來(lái)的一種重要機(jī)制。甜櫻桃與薔薇科諸多果樹一樣具有配子體自交不親和現(xiàn)象。生產(chǎn)中為獲得最佳產(chǎn)量，往往需要配置大量授粉樹保證授粉受精，因此自交不親和基因型的鑒定對(duì)櫻桃生產(chǎn)具有重要的意義。常規(guī)的雜交鑒定方法需要在結(jié)果后才能進(jìn)行，周期長(zhǎng)，占地面積大，并且結(jié)果往往不夠準(zhǔn)確。本研究以甜櫻桃主栽品種為試材，建立了AS-PCR技術(shù)體系，對(duì)不同甜櫻桃品種的花柱S基因型進(jìn)行鑒定，用于指導(dǎo)生產(chǎn)中授粉樹的選擇

2、選配。 最近發(fā)現(xiàn)的SFB(S-單元型特異F-box蛋白基因)是配子體自交不親和花粉決定基因。本研究鑒別了自交親和的S4’單元型的SFB4’基因，并根據(jù)該基因的特點(diǎn)，發(fā)展了一種簡(jiǎn)單實(shí)用的分子標(biāo)記用于櫻桃育種中自交親和基因型的早期鑒定。 具體結(jié)果如下： 1.建立了基于PCR技術(shù)的甜櫻桃品種S基因型鑒定技術(shù)。所設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物組合BFP73/74,BFP93/94擴(kuò)增產(chǎn)物分別包含了甜櫻桃S-RNase基因的第二和第一個(gè)內(nèi)

3、含子，結(jié)合S1，S5基因的特異擴(kuò)增引物，通過(guò)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的不同，就可以對(duì)大部分櫻桃品種的S基因型進(jìn)行鑒定，其可靠性用已知基因型品種進(jìn)行了驗(yàn)證。該技術(shù)體系的建立可以從DNA水平鑒定甜櫻桃S基因型，不受取材時(shí)間的限制，比傳統(tǒng)的雜交授粉方法和S蛋白鑒定方法簡(jiǎn)便實(shí)用，準(zhǔn)確可靠。 2.對(duì)61個(gè)國(guó)內(nèi)外的甜櫻桃品種進(jìn)行了自交不親和基因型的鑒定，首次鑒定了我國(guó)主栽的一些甜櫻桃品種的S基因型，所獲得的甜櫻桃品種S基因型列表對(duì)于指導(dǎo)生產(chǎn)中品種配置和

4、授粉樹的選擇具有很大的作用。 3.依據(jù)甜櫻桃自交不親和的花粉SFB基因設(shè)計(jì)引物，鑒別出了自交親和突變體SFB4’基因中的缺失突變，發(fā)現(xiàn)S4’單元型中花粉部分自交不親和功能的喪失與SFB4’基因中存在缺失突變有關(guān)?；赟FB4’基因中的缺失突變，獲得了SFB4’基因特異分子標(biāo)記，從而區(qū)別開了利用S-RNase基因不能區(qū)分的S4和S4’單元型。該分子標(biāo)記可以在自交親和品種選育工作中用于自交親和品種的早期選擇。 4.培育自交親