甜櫻桃自交不親和基因型AS-PCR鑒定技術研究及應用.pdf

1、自交不親和是高等植物在進化過程中為保持遺傳變異而發(fā)展起來的一種重要機制。甜櫻桃與薔薇科諸多果樹一樣具有配子體自交不親和現(xiàn)象。生產(chǎn)中為獲得最佳產(chǎn)量，往往需要配置大量授粉樹保證授粉受精，因此自交不親和基因型的鑒定對櫻桃生產(chǎn)具有重要的意義。常規(guī)的雜交鑒定方法需要在結果后才能進行，周期長，占地面積大，并且結果往往不夠準確。本研究以甜櫻桃主栽品種為試材，建立了AS-PCR技術體系，對不同甜櫻桃品種的花柱S基因型進行鑒定，用于指導生產(chǎn)中授粉樹的選擇

2、選配。 最近發(fā)現(xiàn)的SFB(S-單元型特異F-box蛋白基因)是配子體自交不親和花粉決定基因。本研究鑒別了自交親和的S4’單元型的SFB4’基因，并根據(jù)該基因的特點，發(fā)展了一種簡單實用的分子標記用于櫻桃育種中自交親和基因型的早期鑒定。 具體結果如下： 1.建立了基于PCR技術的甜櫻桃品種S基因型鑒定技術。所設計的兩對引物組合BFP73/74,BFP93/94擴增產(chǎn)物分別包含了甜櫻桃S-RNase基因的第二和第一個內(nèi)

3、含子，結合S1，S5基因的特異擴增引物，通過擴增片段長度的不同，就可以對大部分櫻桃品種的S基因型進行鑒定，其可靠性用已知基因型品種進行了驗證。該技術體系的建立可以從DNA水平鑒定甜櫻桃S基因型，不受取材時間的限制，比傳統(tǒng)的雜交授粉方法和S蛋白鑒定方法簡便實用，準確可靠。 2.對61個國內(nèi)外的甜櫻桃品種進行了自交不親和基因型的鑒定，首次鑒定了我國主栽的一些甜櫻桃品種的S基因型，所獲得的甜櫻桃品種S基因型列表對于指導生產(chǎn)中品種配置和

4、授粉樹的選擇具有很大的作用。 3.依據(jù)甜櫻桃自交不親和的花粉SFB基因設計引物，鑒別出了自交親和突變體SFB4’基因中的缺失突變，發(fā)現(xiàn)S4’單元型中花粉部分自交不親和功能的喪失與SFB4’基因中存在缺失突變有關?；赟FB4’基因中的缺失突變，獲得了SFB4’基因特異分子標記，從而區(qū)別開了利用S-RNase基因不能區(qū)分的S4和S4’單元型。該分子標記可以在自交親和品種選育工作中用于自交親和品種的早期選擇。 4.培育自交親