甜櫻桃S基因型鑒定及品種遺傳關(guān)系SSR分析.pdf

1、甜櫻桃(Prunus avium L.)種植業(yè)是經(jīng)濟(jì)效益最好的果樹產(chǎn)業(yè)之一，有“黃金種植業(yè)”之稱。它是合格的無(wú)公害食品，其果實(shí)成熟期早，色澤紅艷、晶瑩美觀，果肉香甜。其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、附加值和藥用價(jià)值高，深受人們喜愛。但甜櫻桃的自交不親和性和品種名稱的混雜，限制了甜櫻桃的正確評(píng)價(jià)和合理利用。研究選用5對(duì)薔薇科李屬通用引物組合對(duì)24個(gè)甜櫻桃品種進(jìn)行了S等位基因的PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增出的條帶在進(jìn)行基因克隆測(cè)序，序列在GenBank上進(jìn)行的同源性比較，

2、進(jìn)而確定S基因型，并且利用SSR標(biāo)記技術(shù)探討品種間的遺傳多樣性及親緣關(guān)系，旨在為生產(chǎn)果園授粉樹的合理配置，對(duì)評(píng)價(jià)、利用品種資源及進(jìn)行遺傳育種研究提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)退火溫度、10×PCR Buffer濃度、dNTP濃度、酶濃度和DNA濃度進(jìn)行梯度試驗(yàn)，篩選出適用于本實(shí)驗(yàn)室的S-PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序，擴(kuò)增程序和反應(yīng)程序如下:
　　PCR反應(yīng)體系:每20ul的擴(kuò)增反應(yīng)混合液包括10×PCR Buffe

3、r2.5μL，dNTPs(2.5 mmol.L-1)1.6μL，引物1（10 umol.L-1）、引物2（10 umol.L-1）均為0.8μL，DNA(50 ng-100 ng)0.5μL，TaqDNA聚合酶(5 U.L-1)0.2μL。PCR反應(yīng)程序:預(yù)變性94℃3 min，94℃30 s，32個(gè)循環(huán)(56℃30 s，72℃2 min)，72℃延伸5 min，12℃;
　　2.三對(duì)引物組合對(duì)甜櫻桃品種的擴(kuò)增差異很大，比較而言引

4、物組合PruC2+PruC4R擴(kuò)增效果最好，都能擴(kuò)增出兩條清晰的S基因條帶，而引物組合EM-PC2consFD+EM-PC3consRD擴(kuò)增效果較差，僅一部分品種能擴(kuò)增出來(lái)，引物組合BFP93+BFP94擴(kuò)增效果最差，基本不能擴(kuò)增出條條帶。S1、S5基因特異擴(kuò)增引物組合BFP208+BFP209和BFP212+BFP213對(duì)材料進(jìn)行擴(kuò)增。試材‘布魯克斯’、‘拉賓斯’、‘紅手球’、‘紅寶石’、‘早紅寶石’擴(kuò)增出一條S1基因;‘勝利’擴(kuò)增出

5、一條S5基因條帶。
　　3.采用引物組合PruC2+PruC4R進(jìn)行S-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片段回收克隆、測(cè)序,S基因序列并在GenBank上搜索。結(jié)果表明:在電泳中顯示的相同位置的PCR片段基本是同一種S基因。各S基因擴(kuò)增片段大小分別是:S1為800 bp,S3為762 bp，S4為962 bp，S5為300 bp，S6為456 bp，S9為650 bp;
　　4.通過綜合5對(duì)引物組合的擴(kuò)增結(jié)果，確定了24個(gè)甜櫻桃S基因型，各

6、S基因型結(jié)果如下:紅手球、早紅寶石基因型為S1S3，拉賓斯基因型為S1S4'，紅寶石基因型為S1S6，布魯克斯S基因型為S1S9，那翁S基因型為S3S4，秦林、泰安大紫、先鋒、早大果、麗珠、美早、5-106、左滕錦、桑提娜S基因型為S3S6，黑珍珠、紅燈、薩米脫、秦櫻S基因型為S3S9，勝利S基因型為S5S9，明珠、紅蜜、雷尼、濱庫(kù)S基因型為S6S9;
　　5.在20對(duì)SSR引物中，UDP97-403引物等12對(duì)引物多態(tài)性較高。聚