AQ4N在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)的代謝研究.pdf

1、第一部分高效液相色譜方法測定人腦腫瘤微粒體中AQ4N及孵育代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4含量 目的：尋找簡便、快捷、高靈敏度的檢測人腦腫瘤微粒體中AQ4N及孵育代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4濃度的方法。 方法：通過建立高效液相色譜方法(HPLC)測定人腦腫瘤微粒體內(nèi)的AQ4N及孵育代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4的含量。 結(jié)果：建立了高效液相色譜方法(HPLC)測定人腦腫瘤微粒體孵育體系中AQ4N及孵育代謝產(chǎn)

2、物AQ4M，AQ4的含量，并對該方法進行了方法學(xué)驗證。其線性范圍為：AQ4N 2.245-71.850μg／ml；AQ4M0.366-11.700μg／ml；AQ4 0.740-23.700μg／ml，相關(guān)系數(shù)r為：AQ4N0.99602；AQ4M 0.99644；AQ4 0.99984，最小檢出濃度為AQ4N1.422μg/ml，AQ4M 0.281μg/ml，AQ4 0.712μg/ml。 結(jié)論：本方法用于檢測人腦腫瘤

3、微粒體孵育體系中AQ4N及代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4的含量，簡單、快捷、具有高靈敏度。 第二部分 AQ4N在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)的代謝 目的：目前，對腫瘤微粒體內(nèi)的物質(zhì)代謝進行的研究還很有限。AQ4N是一種在無氧或低氧狀態(tài)下(通常存在于實質(zhì)性腫瘤內(nèi))被CYP450代謝轉(zhuǎn)化產(chǎn)生毒性代謝產(chǎn)物的新型抗腫瘤前藥。本實驗擬通過AQ4N在低氧狀態(tài)的原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)的代謝對腫瘤微環(huán)境內(nèi)的藥物代謝及相關(guān)CYP4

4、50酶對代謝的作用進行探討。 方法：白臨床上取得人腦腫瘤組織標本后，以差速離心法制備腫瘤微粒體，以Lowry法進行蛋白定量。在37℃的水浴中建立孵育體系，加入AQ4N和／或CYP3A的抑制劑三乙酰竹桃霉素及CYP1A1／1B1的抑制劑白藜蘆醇，通過HPLC方法檢測AQ4N在低氧狀態(tài)下15個腦腫瘤(7個原發(fā)性腦腫瘤及8個來源于肺癌的轉(zhuǎn)移性腦腫瘤)微粒體孵育體系內(nèi)的代謝產(chǎn)物及加入抑制劑后的代謝產(chǎn)物。 結(jié)果：在15個腦

5、腫瘤微粒體的孵育體系中都可檢測到AQ4N的代謝產(chǎn)物AQ4M及AQ4，尤其是表達CYP3A4的來源于肺癌的轉(zhuǎn)移性腦腫瘤(S20，S21)中，AQ4檢出量最高，并且三乙酰竹桃霉素能夠明顯抑制這些標本內(nèi)的AQ4N的代謝，白藜蘆醇則影響輕微。另外13／15個腦腫瘤標本(除了S20，S21)可以觀察到白藜蘆醇對微粒體內(nèi)AQ4N代謝的抑制，但三乙酰竹桃霉素則抑制作用微弱。 結(jié)論：AQ4N確實可以在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)進行轉(zhuǎn)化，并且與