人食管癌組織血管內(nèi)皮生長因子基因表達和其反義RNA體內(nèi)外抑瘤作用的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學博士學位論文人食管癌組織血管內(nèi)皮生長因子基因表達和其反義RNA體內(nèi)外抑瘤作用的研究姓名：潘立峰申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：白世祥;單保恩20040401中文摘要V E G F m R N A 的表達，探討了以V E G F 為靶點治療食管癌的可行性。結(jié)果：1 ．V E G F 蛋白在食管癌組織的陽性表達率為7 0 ．9 ％，V E G F 蛋白的農(nóng)達水、I t 與食管癌組織的病理學分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關；

2、而與腫瘤人小、T N M 分期、性別、年齡無關。提示V E G F 在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用。2 ．食管癌組織中微血管分布不均，血管密集區(qū)豐要集中在癌灶邊緣；M V D 與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關：M V D與V E G F 的表達之問存在正相關性( r = 0 ．4 5 6 ，P < O ．0 t ) 。提示v E G F 具有促進忡癡向管形成的作用。3 ．食管癌細胞株T E ．1 、T E ．1 0 和食管癌組織

3、中的V E G F m R N A 表達以V E G F l 8 9 、V E G F l 6 5 、V E G F l 2 I 三種亞型為主；腫蝻紕釤{ V E G F m R N A 的表達量比癌旁組織增高( P < O 。0 1 ) ；V E G F l 2 1 和V E G F l 6 5 兩個低分子量亞型表達量較高。結(jié)論：V E G F 基兇在食管癌組織中呈過度表達現(xiàn)象可能與食管癌的發(fā)叫! 、發(fā)展有關；并且與腫瘤惡性程度

4、、轉(zhuǎn)移、微血管形成能力相關。此研究結(jié)果對深入探討食管癌與V E G F 基因的關系提供了有意義的理論基礎及實驗依據(jù)。第二部分V E G F 反義R N A 對食管癌細胞T E 一1 的體外抑制作用的研究目的：研究T E ．1 細胞經(jīng)V E G F 反義R N A 處理后對細胞增殖周期及細胞捌廣的影響。方法： 1 ．質(zhì)粒的擴增、提取及鑒定：采用D H 5 。大腸桿菌為工作菌，制備感受態(tài)細菌，擴增質(zhì)粒，提取質(zhì)粒D N A ，并經(jīng)酶切鑒定以各

5、轉(zhuǎn)染使用。2 ．細胞的轉(zhuǎn)化、細胞體外增殖及V E G F 封閉作用檢測：利用高表達V E G F m R N A 及蛋白的食管癌細胞系( T E ．1 細胞) 為體外細胞系模型，將含有反義V E G F c D N A 、p c D N A 3 ．1 空載體質(zhì)粒通過脂質(zhì)體導入T E ．I 細胞；川M T T 法檢測三組細胞( 轉(zhuǎn)染反義R N A 組、空載體組和對照組) 增殖情況：采用免疫組織化學法檢測三組細胞V E G F 基因的蛋白表

6、達；細胞原傅；I } 交和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應( R T - P C R ) 技術檢測三組細胞V E G F m R N A 的表達；流式細胞術檢測三組細胞的凋亡率和細胞周期分們j 。結(jié)果：1 ．采用脂質(zhì)體可以成功地將V E G F c D N A 轉(zhuǎn)入食管癌T E - 1 細胞- I - ：2 ．三組細胞( 轉(zhuǎn)染反義R N A 組、空載體組和對照組) 體外增殖反戍無明漫薺異：3 ．與對照組和空載體組細胞相比，反義組的T E ．1 細胞表