MLA對小鼠腦神經(jīng)元作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討α7nAChR競爭性拮抗劑（MLA）對昆明小鼠腦神經(jīng)元的損傷及六味地黃丸（LDP）的保護作用。 方法：實驗一 MLA對昆明小鼠腦神經(jīng)元的損傷作用研究給予昆明小鼠腹腔注射MLA不同劑量(1.0、2.4、4.8 mg/kg)、不同天數(shù)(1d、3d、6d)后，測試各組小鼠Morris 水迷宮（MWM）學習記憶能力，并觀察細胞超微結(jié)構(gòu)改變以及α7nAChR免疫組織化學陽性表達的變化。實驗二 LDP對昆明小鼠腦神經(jīng)元的保護作用研

2、究（1） LDP預防組：①LDP組：實驗小鼠灌胃LDP不同療程（28d、10d）；②LDP+MLA組：實驗小鼠先灌胃LDP不同療程（28d、10d）后，連續(xù)腹腔注射 MLA 4.8 mg/kg 6d；（2）LDP治療組（MLA+LDP組）：實驗小鼠連續(xù)腹腔注射MLA 4.8 mg/kg 6d后，接著LDP灌胃10d。測試預防、治療各組小鼠Morris 水迷宮學習記憶能力，并觀察細胞超微結(jié)構(gòu)改變以及α7nAChR免疫組織化學陽性表達的變化

3、。 結(jié)果：實驗一（1）MLA對小鼠MWM學習記憶行為的影響：定位航行試驗結(jié)果，腹腔注射MLA1.0和2.4mg/kg各組小鼠的逃逸潛伏期與生理鹽水對照組比較無顯著性差異(P>0.05)，而MLA4.8mg/kg連續(xù)3d和6d組小鼠的逃逸潛伏期較生理鹽水對照組的明顯延長，有顯著性差異( (P<0.01)；空間探索試驗結(jié)果，腹腔注射MLA1.0和2.4mg/kg各組小鼠在目標象限的時間分布與生理鹽水對照組比較無顯著性差異(P>0.

4、05)，MLA4.8mg/kg連續(xù)3d和6d組目標象限的時間分布比生理鹽水對照組小鼠的明顯減少，有顯著性差異(P<0.01)。各組小鼠在各測試時段的游泳速度以及在可見平臺試驗中的逃逸潛伏期和目標象限的時間分布與生理鹽水對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)；（2）細胞超微結(jié)構(gòu)觀察：腹腔注射MLA1.0和2.4mg/kg各組小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)未見異常，腹腔注射MLA4.8mg/kg連續(xù)3d組損傷輕微，突觸小泡適中，細胞器結(jié)構(gòu)尚

5、可，核膜結(jié)構(gòu)基本清晰；而腹腔注射MLA4.8mg/kg連續(xù)6d組損傷比較嚴重，突觸減少，突觸前、后膜結(jié)構(gòu)不清晰，突觸小泡數(shù)量減少，部分神經(jīng)元細胞核有固縮狀態(tài)，核膜略微增厚和畸變，線粒體腫脹，有溶酶體出現(xiàn)。（3）免疫組織化學結(jié)果：腹腔注射MLA1.0 、2.4 mg/kg各組小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)有α7nAChR陽性神經(jīng)元表達。實驗二（1）LDP對小鼠MWM學習記憶行為的影響：定位航行試驗結(jié)果，①LDP組：僅灌胃LDP組小鼠逃逸潛伏期與生理鹽

6、水對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；②LDP預防（LDP+MLA）組和LDP治療（MLA+LDP）組小鼠的逃逸潛伏期與生理鹽水對照組比較明顯延長，有顯著性差異(P<0.01)，與MLA損傷組比較有縮短趨勢，但無顯著性差異(P>0.05)?？臻g探索試驗結(jié)果，①LDP組：僅灌胃LDP組小鼠目標象限的時間分布與生理鹽水對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；②LDP預防（LDP+MLA）組和LDP治療（MLA+LDP）組小鼠目標象限的時

7、間分布較生理鹽水對照組明顯下降，有顯著性差異(P<0.01)；與MLA損傷組比較均無顯著性差異(P>0.05)；各組小鼠在各測試時段的游泳速度以及在可見平臺試驗中的的逃逸潛伏期和目標象限的時間分布均無顯著性差異(P>0.05)。（2）細胞超微結(jié)構(gòu)觀察：①LDP組：僅灌胃LDP組小鼠腦海馬、皮質(zhì)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常；②LDP預防（LDP+MLA）組有損傷，但與MLA損傷組比較，損傷程度輕；③LDP治療（MLA+LDP）組損傷較重，與MLA損傷組

8、比較有輕微改善。（3）免疫組織化學結(jié)果，LDP組、LDP預防（LDP+MLA）組和LDP治療（MLA+LDP）組小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)均有α7nAChR陽性神經(jīng)元表達。 結(jié)論：（1）連續(xù)3d以上小鼠腹腔注射α7nAChR競爭性拮抗劑MLA4.8mg/kg能夠造成小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元的損傷，進而導致小鼠的學習記憶障礙，可作為較合理的近期記憶損傷動物模型。（2）預防性灌胃LDP和治療性灌胃LDP均能夠抑制MLA對實驗小鼠神經(jīng)元損傷