2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、類鈣調(diào)神經(jīng)素B亞基蛋白(CBL)是植物中普遍存在的一種鈣感受器家族。很多研究表明CBL在植物響應(yīng)生物脅迫和非生物脅迫中起著至關(guān)重要的作用。因此,它被認(rèn)為是基因抗逆育種工作中很重要的候選基因。
  本研究旨在從林煙草中分離CBL基因并對(duì)其進(jìn)行功能驗(yàn)證。主要工作內(nèi)容如下:
  1.利用同源克隆的策略,從林煙草的葉片中獲得一個(gè)基因。進(jìn)化樹分析表明該基因與其它物種中的CBL2基因在同一個(gè)分支上。因此將其命名為林煙草CBL2基因。多序

2、列比對(duì)分析表明林煙草CBL2蛋白與擬南芥CBL2蛋白的序列相似度高達(dá)89.38%,與楊樹、水稻和玉米CBL2蛋白的序列相似度分別為86.22%、84.00%、48.21%。
  2. NsylCBL2的CDS序列全長(zhǎng)為675 bp,編碼一個(gè)由223個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),其基因組包括7個(gè)內(nèi)含子和8個(gè)外顯子。NsylCBL2的4個(gè)EF手型結(jié)構(gòu)之間的距離分別為23、25和32個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析表明NsylCBL2的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)與

3、其它物種中CBL2相似。
  3.通過浸花法將NsylCBL2轉(zhuǎn)入擬南芥中,對(duì)T1代植株進(jìn)行RCR陽性鑒定和RT-PCR表達(dá)量檢測(cè),對(duì)T2和T3代植株進(jìn)行抗性篩選,T3代純合株系用來進(jìn)行NsylCBL2的功能驗(yàn)證,擬南芥cbl2突變體從TAIR上訂購并進(jìn)行了T-DNA插入驗(yàn)證。
  4.已有研究表明CBL2基因參與鹽和鎂的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),因此本試驗(yàn)也進(jìn)行了高鹽和高鎂處理,來檢測(cè)NsylCBL2是否也具有這樣的功能。但是萌發(fā)、表型觀

4、察和生理數(shù)據(jù)表明過表達(dá)NsylCBL2擬南芥植株、突變體與野生型在這些處理下沒有明顯差異。因此, NsylCBL2可能不參與鹽與鎂的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
  5.另一方面,pCHF3-NsylCBL2這個(gè)質(zhì)粒通過葉盤轉(zhuǎn)化法侵染到煙草里面。過表達(dá)轉(zhuǎn)基因煙草就已經(jīng)獲得,并且表達(dá)量水平高于普通煙草。從轉(zhuǎn)基因煙草收到種子后做特定的抗性篩選檢測(cè)測(cè)試,獲得符合3:1比例的T1代,然后種到溫室獲得T2代,供以后的實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
  6.獲得NsylC

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