乳及乳制品中結核分枝桿菌檢測方法-熒光定量PCR法.pdf

1、結核分枝桿菌是引起結核?。˙ovine tuberculosis）的重要人獸共患傳染病病原，一直困擾世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，危害著人類和動物健康，給社會造成了巨大的經濟損失。世界動物衛(wèi)生組織將其列為B類動物傳染病，我國將其列為二類動物傳染病。全世界各國每年均花費大量的人力、物力和財力去防制本病的發(fā)生。OIE指定的檢測方法是結核菌素試驗方法，但該方法受物理、化學以及生物因素影響，導致實驗結果的特異性、敏感性不高；經典的細菌分離培養(yǎng)受到分枝桿

2、菌生長緩慢的影響，檢測周期長。對于出入境檢驗檢疫，乳及乳制品中結核分枝桿菌的快速檢測方法的建立又顯得尤為重要。因此建立快速、靈敏、特異的檢測乳及乳制品中結核分枝桿菌方法對于出入境檢驗檢疫及本病的防控具有重要意義。
　　本研究根據結核分支桿菌保守序列設計特異引物，建立了結核分枝桿菌的實時熒光定量 PCR檢測法。對該方法的靈敏度、特異性和重復性進行研究，結果表明：所建立的實時熒光定量 PCR方法標準曲線線性關系良好，得到標準曲線方程為

3、y=-3.29x+38.6，相關系數為0.9980；敏感性高，可達1×102 copies/μL，亦可達10 CFU/5mL?？垢蓴_能力強，僅結核分枝桿菌出現(xiàn)特異性擴增曲線。重復性良好，分別用不同濃度的標準質粒進行組內和組間平行試驗，結果顯示批內和批間的變異系數均小于1％。經大連動物疾病預防控制中心、吉林出入境檢驗檢疫局、河南出入境檢驗檢疫局、山東出入境檢驗檢疫局、黑龍江出入境檢驗檢疫局等5家單位驗證，表明該實時熒光定量 PCR方法能準