基于高通量測序技術(shù)的惡性瘧原蟲Plasmodium falciparum3D7蟲株紅內(nèi)期新的長鏈非編碼RNA的分析與初步驗證.pdf

1、瘧疾是由瘧原蟲引起的一種嚴(yán)重的寄生蟲病。其中，惡性瘧原蟲是導(dǎo)致人類瘧疾感染致死率最高的病原體。
　　惡性瘧原蟲的生活史包括在人體內(nèi)的無性繁殖階段（紅外期和紅內(nèi)期）以及在蚊體內(nèi)的有性繁殖期（蚊期）。惡性瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)期的裂體增殖是瘧疾發(fā)作的基礎(chǔ)，包括從裂殖子侵入紅細(xì)胞開始的裂殖子期、環(huán)狀體期、早期和晚期滋養(yǎng)體期直至裂殖體期。研究惡性瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)的生長發(fā)育過程具有非常重要的意義。
　　長鏈非編碼RNA是一類長度大于200核

2、苷酸并且不具有蛋白編碼能力的轉(zhuǎn)錄本，占全部非編碼RNA的近80％。研究表明，lncRNA可通過繁復(fù)的機制參與有機體的各種活動，如表觀遺傳學(xué)修飾、轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控以及剪切拼接控制細(xì)胞周期、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡等。惡性瘧原蟲基因組轉(zhuǎn)錄大量的lncRNA，但這些lncRNA在惡性瘧原蟲的增殖發(fā)育過程中的作用卻知之甚少。
　　為了探索惡性瘧原蟲紅內(nèi)期不同發(fā)育階段的lncRNA表達(dá)譜及其特異性。本研究采用山梨醇連續(xù)多次處理體外培養(yǎng)并處于環(huán)狀體的

3、惡性瘧原蟲蟲株，獲得高度同步化、窗口小、蟲血率高并處于不同生長階段的惡性瘧原蟲蟲株，選取環(huán)期以及裂殖體期構(gòu)建了2個時期的鏈特異性文庫，并進行Illumina/Solexa雙末端測序。通過進一步對環(huán)期與裂殖體期的測序數(shù)據(jù)進行生物信息學(xué)分析，序列比對、序列拼接、編碼潛能分析預(yù)測了55條在紅內(nèi)期特異性表達(dá)的lncRNA。其中13條lncRNA通過RT-PCR得到驗證，為后期進一步研究惡性瘧原蟲紅內(nèi)期期特異性表達(dá)的lncRNAs的功能提供了基本