轉(zhuǎn)鐵蛋白受體在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:肺癌是當(dāng)今世界最常見的癌癥，其中非小細(xì)胞肺癌(NonSmall Cell Lung Cancer，NSCLC)所占比例超過85％。而由于工業(yè)化、城鎮(zhèn)化、人口老齡化等進(jìn)程的加快以及不良生活方式和環(huán)境污染的持續(xù)存在，肺癌形勢(shì)將愈發(fā)嚴(yán)峻，也給肺癌的臨床診治帶來了新的挑戰(zhàn)與機(jī)遇。臨床工作中我們注意到許多肺癌患者存在異常鐵代謝情況，已有的研究也表明細(xì)胞鐵過載是促進(jìn)惡性腫瘤產(chǎn)生的重要原因之一，而轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrin recep

2、tor，TfR)在細(xì)胞鐵過載（特別是鐵攝入和轉(zhuǎn)運(yùn)）過程扮演重要作用，因此本研究開創(chuàng)性地著眼于肺癌患者的異常鐵代謝情況，從TfR在NSCLC中的表達(dá)情況入手，結(jié)合有關(guān)臨床病理資料相對(duì)全面系統(tǒng)地分析NSCLC中TfR表達(dá)的臨床意義，同時(shí)國(guó)內(nèi)外首次在細(xì)胞層面檢測(cè)7種不同的常見NSCLC細(xì)胞系(A549、H23、PC9、H1299、H520、H125和H460)的TfR表達(dá)情況，并探討TfR在NSCLC細(xì)胞增殖生長(zhǎng)中可能的作用機(jī)制，從而明確Tf

3、R在NSCLC中潛在或現(xiàn)實(shí)的基礎(chǔ)或臨床價(jià)值。
　　方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)42例NSCLC組織標(biāo)本和23例正常肺組織標(biāo)本中TfR蛋白的表達(dá)情況，結(jié)合有關(guān)臨床病理資料分析TfR表達(dá)情況與NSCLC組織臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。應(yīng)用WesternBlot方法進(jìn)一步測(cè)定7種常見經(jīng)典NSCLC細(xì)胞株(A549、H23、PC9、H1299、H520、H125和H460)和正常人支氣管上皮細(xì)胞株HBE中TfR蛋白的表達(dá)水平，選擇表達(dá)水平最

4、高、最穩(wěn)定的某一細(xì)胞株以轉(zhuǎn)染siRNA干擾技術(shù)沉默其TfR基因使TfR表達(dá)降低，然后應(yīng)用WST-8試驗(yàn)和平板克隆形成試驗(yàn)研究TfR表達(dá)水平降低對(duì)該株細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的影響，并進(jìn)而推斷TfR對(duì)該肺癌細(xì)胞株增殖生長(zhǎng)影響的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肺組織細(xì)胞TfR主要表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)膜性結(jié)構(gòu)，以支氣管粘膜上皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞多見。NSCLC組織TfR陽性表達(dá)率為88.10％(37/42)，表達(dá)積分3.92±2.12，

5、均明顯高于正常肺組織[TfR陽性表達(dá)率21.74％(5/23)，表達(dá)積分0.73±1.35](P＜0.05);此外，分析發(fā)現(xiàn)NSCLC組織TfR表達(dá)水平與患者年齡、性別、吸煙史、腫瘤類型、腫瘤分化程度、腫瘤大小及臨床分期等臨床病理特征均無相關(guān)性(P＞0.05)。Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上述7種NSCLC細(xì)胞TfR表達(dá)水平較正常肺HBE細(xì)胞均升高，其中以H520細(xì)胞株TfR表達(dá)水平最高、表達(dá)最穩(wěn)定。熒光細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率約為75.8％，

6、提示H520細(xì)胞siRNA轉(zhuǎn)染成功，同時(shí)Western Blot檢測(cè)證實(shí)3個(gè)不同的siRNA干擾序列均有效沉默H520細(xì)胞TfR基因并明顯降低TfR表達(dá)，以TfR-homo-2061序列干擾效果最佳;WST-8試驗(yàn)和平板克隆形成試驗(yàn)則表明，TfR表達(dá)水平下降對(duì)肺癌H520細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)有明顯抑制作用。
　　結(jié)論:1.NSCLC組織TfR表達(dá)水平明顯高于正常肺組織，其表達(dá)水平與患者年齡、性別、吸煙史、腫瘤病理類型、腫瘤分化程度、腫瘤