42516.人轉鐵蛋白在轉基因動物中表達的研究

1、上海交通大學博士學位論文人轉鐵蛋白在轉基因動物中表達的研究姓名：顏景斌申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：曾溢滔20070510人轉鐵蛋白在轉基因動物中表達的研究2另外，初步的結果顯示慢病毒介導的轉基因小鼠制備方法不僅整合效率比原核顯微注射高近3倍，而且人轉鐵蛋白的平均表達水平明顯高于顯微注射獲得的小鼠。但外源基因在小鼠各臟器中的表達模式兩者之間沒有明顯的差異，均主要在肝臟和乳腺中表達，心臟、腎臟等其它臟器僅有較低的表

2、達。與此同時，本文還對利用細胞體外轉染和體細胞核移植技術制備的轉基因克隆胎牛中人轉鐵蛋白基因整合、表達情況進行了分析。結果證實外源基因以單拷貝的形式整合在?；蚪M中，整合位點離最近的一個牛功能基因約220Kb，而人轉鐵蛋白主要在肝臟中檢出了表達。另外，本文分別設計了兩條針對小鼠β酪蛋白基因和三條針對乳清酸蛋白基因的干擾載體，將這些載體分別注射哺乳期的人轉鐵蛋白轉基因小鼠乳腺。結果顯示大部分干擾載體不僅能有效降低小鼠內(nèi)源性乳蛋白的表達水平

3、，而且在一定程度上提高了外源人轉鐵蛋白的表達，最高的提高了近一倍。同時通過顯微注射的方法制備了整合干擾載體的轉基因小鼠，對1只已進入泌乳期的小鼠分析顯示內(nèi)源性β酪蛋白相對濃度僅為正常小鼠的約70％。本文系統(tǒng)地分析了不同調(diào)控元件對人轉鐵蛋白在動物各臟器中表達的調(diào)節(jié)作用，為這些調(diào)控元件的功能研究提供了科學的數(shù)據(jù)，并獲得了一批可在乳汁和血漿中高效表達人轉鐵蛋白的轉基因動物。同時采用干擾內(nèi)源性乳蛋白的方法來提高外源基因表達水平，為乳腺生物反應器