Notch基因在慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的表達(dá)和介導(dǎo)抗凋亡、耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、背景：慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)是一種好發(fā)于老年人的惰性B淋巴細(xì)胞腫瘤，是西方國家最常見的成人血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一。雖然我國的發(fā)病率低于西方國家，但由于我國人口基數(shù)大，伴隨著老年化社會(huì)的到來及診斷水平的提高，我國的CLL患者逐年增多。目前該病仍認(rèn)為是不可治愈的疾病。研究發(fā)現(xiàn)Notch分子參與了CLL細(xì)胞存活、抗凋亡及抗化療的過程，但具體機(jī)制尚未完全闡明。因此研究Notch分子在

2、CLL細(xì)胞的表達(dá)特點(diǎn)，及該分子在CLL的發(fā)病機(jī)制，尤其是耐藥機(jī)制的地位具有重要臨床意義，為探索CLL的新靶向治療方法提供思路。
　　目的：檢測(cè)原代慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Notch基因的表達(dá)情況；研究阿糖胞苷及地塞米松作用后腫瘤細(xì)胞Notch基因的變化情況，進(jìn)一步探討Notch基因介導(dǎo)慢性淋巴細(xì)胞白血病抗凋亡及耐藥機(jī)制。
　　方法：收集慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)患者12例、急性白血病(AL)患者12例的骨髓血或外周血標(biāo)本，以

3、健康體檢者(control)8例作為對(duì)照組，采用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測(cè)單個(gè)核細(xì)胞表面Notch分子的表達(dá)情況；收集慢性淋巴細(xì)胞白血病初治患者24例的骨髓血或外周血單個(gè)核細(xì)胞，以健康體檢者14例作為對(duì)照組，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)Notch及Bcl-2、NF-κB基因的轉(zhuǎn)錄水平；應(yīng)用qRT-PCR及蛋白質(zhì)印記(Western-blot)檢測(cè)L1210細(xì)胞株在化療藥物阿糖胞苷、地塞米松作用后，Notch基因mRNA水

4、平及蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：1、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)單個(gè)核細(xì)胞表面Notch分子的表達(dá)，CLL組和AL組均高于正常對(duì)照組，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；2、CLL組的Notch1、Notch2、Bcl-2、NF-κB基因的mRNA水平表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，分別為0.8556±0.8726和0.6731±0.5334(P=0.0182)、1.2273±0.8207和0.6577±0.6424(P﹤0.0001)、8.0960±7.5661和

5、0.5969±0.4976(P﹤0.0001)、1.0966±0.6925和0.5373±0.7180(P﹤0.0001)，而兩組的Notch3和Notch4基因的mRNA水平未見明顯差異；3、L1210細(xì)胞在化療藥物阿糖胞苷、地塞米松作用后，Notch及NF-κB基因轉(zhuǎn)錄水平無明顯改變；4、L1210細(xì)胞在低濃度、中濃度阿糖胞苷作用24h后，Notch1蛋白表達(dá)明顯下降，在高濃度阿糖胞苷或延長(zhǎng)中濃度阿糖胞苷組的作用時(shí)間，Notch1蛋