hClock蛋白和P16蛋白在食管癌中表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、食管癌是一種常見的消化道腫瘤，統(tǒng)計(jì)資料顯示，全世界每年約30萬人死于食管癌[1-2]。我國是食管癌高發(fā)地區(qū)，每年因食管癌死亡者約15萬人，約占全部癌癥患者死亡人數(shù)的四分之一，死亡率位居第二位[2]。目前手術(shù)切除是治療本病的主要方法，早期切除?？蛇_(dá)到根治效果，其5年生存率可達(dá)90％[37]，因此早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期手術(shù)治療是一個(gè)行之有效的措施。但是，由于目前的診療水平所限，患者就診時(shí)往往病患多已屬中晚期，診療效果大打折扣，為提高食管癌

2、的早期診斷水平，遴選新的腫瘤相關(guān)指標(biāo)，具有重要的臨床意義。腫瘤的衍生和進(jìn)展，是一個(gè)多基因、多步驟的演進(jìn)過程，對(duì)于食管癌而言，其衍生進(jìn)展的過程與許多抑癌基因、原癌基因以及凋亡基因的生物活性改變相關(guān)，但是至今還不能明確肯定那一個(gè)單一基因與食管癌的發(fā)生、進(jìn)展具有特異的相關(guān)性，許多候選基因在食管癌演進(jìn)過程中的作用機(jī)理尚有待進(jìn)一步闡明。
　　hClock是Takahashi于1997年首先成功克隆的一種近日鐘基因家族成員[6]，該基因家族通

3、過自身的表達(dá)調(diào)控形成自激振蕩，完成對(duì)機(jī)體的生物節(jié)律調(diào)控，研究發(fā)現(xiàn)近日鐘基因不僅與近日節(jié)律的變化有關(guān)，還維持生物體正常的生命活動(dòng)[19]。目前已發(fā)現(xiàn)10種近口鐘基因:hClock、hBmall、hHcry1、hHcry2、hPer1、hPer2、hPer3、hDec1、hDec2和hTim3[38]，其中hBmall基因與hClock基因是一對(duì)分子伴侶，它們結(jié)合在一起構(gòu)成了異二聚體[39]，共同介導(dǎo)并調(diào)控其他鐘基因的轉(zhuǎn)錄過程，由此看出hC

4、lock基因在生物鐘基因家族中起著核心作用，地位尤為重要。
　　p16基因是1993年由serrano最早分離和鑒定的[40]，位于人染色體9p21，包含3個(gè)外顯子，編碼由156個(gè)氨基酸殘基組成，分子量約為16kD的P16蛋白，p16基因也被稱為多腫瘤抑制基因1(multiple tumorsuppressor gene1，MTS1)，是人體中最重要的抑癌基因之一[8]。相關(guān)的研究表明，約有75％的癌細(xì)胞株有p16基因的突變和缺失

5、，均會(huì)導(dǎo)致相關(guān)P16蛋白的合成障礙，使細(xì)胞增殖失控而發(fā)生癌變[41*10]。hClock蛋白和P16蛋白是參與細(xì)胞周期節(jié)律調(diào)控的基因表達(dá)產(chǎn)物，而各種腫瘤的發(fā)生也與細(xì)胞周期節(jié)律異常關(guān)系密切。
　　新的研究表明，hClock與p16參與了食管癌的演進(jìn)過程，hClock蛋白在食管癌的演進(jìn)發(fā)展過程中表達(dá)呈現(xiàn)正向增高，而P16蛋白在食管癌的發(fā)展過程中表達(dá)呈減低趨勢(shì)[42]。本研究通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法觀察hClock蛋白和P16蛋白在食

6、管癌組織及正常食管組織中的表達(dá)，并分析其在食管癌發(fā)生和發(fā)展及腫瘤轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)、臨床分期中的關(guān)系，探討hClock可能作為致癌基因及p16作為抑癌基因在食管癌的診斷和治療的臨床價(jià)值，研究食管癌的發(fā)病機(jī)制，為其治療提供新的靶點(diǎn)。
　　材料與方法
　　本實(shí)驗(yàn)選取泰安市中心醫(yī)院腫瘤外科自2012年11月至2013年6月收治的36例食管癌病人，病人均經(jīng)過手術(shù)治療，切除的食管癌標(biāo)本經(jīng)兩名病理科醫(yī)師獨(dú)立診斷證實(shí)為食管鱗狀細(xì)胞癌，36例標(biāo)

7、本中癌組織作為實(shí)驗(yàn)組，相應(yīng)標(biāo)本的上切緣組織即距腫瘤5cm以上的正常食管組織作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組進(jìn)行配對(duì)分組研究。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)hClock蛋白和P16蛋白在食管癌組織及與其配對(duì)正常組織中表達(dá)的差異，探討兩者在腫瘤演生、進(jìn)展過程中的作用。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，hClock、p16與食管癌臨床病理因素之間的分析采用行X2檢驗(yàn)。hClock與p16表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以α=0.0

8、5作為統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果
　　1.36例食管癌中，hClock蛋白呈高表達(dá)，表達(dá)陽性者為34例，陽性表達(dá)率為94.44％，正常食管粘膜組織中hClock蛋白表達(dá)陽性為28例，陽性表達(dá)率為72.22％，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.hClock蛋白表達(dá)與食管癌的腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度、病理分期、性別、年齡沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的相關(guān)性。腫瘤的大小:T1+T2組和T3+T4組的陽性率分別為94.1

9、2％和94.74％，兩組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度:N0+N1組與N2+N3組的陽性表達(dá)率分別為92.59％和100％，兩組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;病理分期Ⅰ期與Ⅱ期及Ⅰ期與Ⅲ期+Ⅳ期間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅱ期與Ⅱ期比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.P16蛋白在食管癌中呈低表達(dá)，陽性表達(dá)率為63.89％(23/36)。在36例食管癌旁正常組織中，可見高表達(dá)，陽性率為88.89％(3

10、2/36)二者有顯著差別(P＜0.05）;
　　4.P16蛋白與食管癌的癌組織腫瘤的大小具有相關(guān)性:T1+T2組和T3+T4組的陽性率分別為82.35％和47.37％，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與食管癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，N0-1組和N2-3組的陽性率分別為74.07和33.33，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.hClock和p16的表達(dá)在食管癌組織中具有負(fù)相關(guān)性，36例食管癌組織中，hClo

11、ck和p16同時(shí)表達(dá)為陽性者占13.89％(5/36)，hClock和p16都表達(dá)為陰性者占2.78％(1/36)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析:hClock和p16表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(rs=-0.347，P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　1.hClock蛋白在食管癌組織中的陽性表達(dá)率高于正常食管組織，P16蛋白在食管癌中呈低表達(dá)。
　　2.hClock蛋白的陽性表達(dá)與臨床分期及腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。
　　3.P16蛋白在食