人類軟骨糖蛋白-39對關(guān)節(jié)軟骨祖母細胞增殖影響的研究.pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(OA)是臨床一種常見的多發(fā)生于老年人群的關(guān)節(jié)退行性疾病。人類軟骨糖蛋白-39(HC gp-39)作為軟骨自身分泌的細胞因子,對骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞增殖與分化的作用如何,目前尚缺乏統(tǒng)一定論。本研究對人體的軟骨細胞進行體外培養(yǎng)、分離,觀察HC gp-39對關(guān)節(jié)軟骨細胞及祖母細胞增殖的影響。
　　方法:采用流式分選的方法所得的軟骨祖母細胞,進行表型鑒定,流式分選,確定軟骨祖細胞(CD105+、CD166+)的百分率后,將細胞

2、接種于96孔板,對其進行擴大傳代培養(yǎng),待細胞充分貼壁后,加入HCgp-39,濃度分別為0,25,50,100,500ng/ml。每種濃度設(shè)3個復(fù)孔,分別培養(yǎng)24、48、72小時后,收集各個時間點(0h、24h、48h、72h)的細胞,加入10μl的MTS檢測液,孵育4小時后二甲亞砜(DMSO)終止反應(yīng),酶標儀570nm波長檢測各孔光的吸收值(OD值),按公式增殖率=其他時間點OD值÷0小時OD值×100％(同一樣品)計算細胞的增值率并進

3、行比較。
　　結(jié)果:關(guān)節(jié)軟骨細胞中能夠分離提取表達CD205/CD166的細胞,即軟骨祖母細胞;在發(fā)生OA的關(guān)節(jié)軟骨細胞中分離提取的軟骨祖母細胞細胞增殖速度快于正常組;在正常軟骨祖母細胞中加入HC gp-39時,祖母細胞的增殖率隨加入的濃度增高而不斷降低;而對于OA軟骨祖母細胞,加入HC gp-39后,祖母細胞的增殖率明顯增高,且具有時間濃度依賴效應(yīng)。
　　結(jié)論:在成人的關(guān)節(jié)軟骨中存在軟骨祖母細胞;發(fā)生OA時關(guān)節(jié)周圍的內(nèi)環(huán)境